损伤软骨的细胞提
发布时间：2022-01-08 19:30
目的对从膝关节软骨损伤区分离出的细胞进行鉴定,并对其生长活性进行研究,以解决自体软骨细胞移植中软骨细胞来源不足的问题。方法通过膝关节镜,在软骨损伤区取少量损伤软骨组织,不含正常软骨及软骨下骨为实验组;取正常软骨组织为对照组。在胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶作用下从实验组中提取细胞,对照组中提取正常软骨细胞。实验组细胞培养贴壁后在倒置相差显微镜下观察细胞的形态是否与对照组软骨细胞一致。实验组细胞行甲苯胺蓝染色鉴定,与对照组对比;噻唑蓝（MTT）法比较两组细胞生长活性;以具有专利知识产权的Ⅰ/Ⅱ型复合胶原膜为生长载体,培养实验组和对照组第3代软骨细胞,在电镜下观察两组生长活性。结果从少量损伤的软骨组织中提取的细胞为活性正常的软骨细胞,其特征及生长活性与对照组比较,差异无统计学意义（P<0.05）。结论软骨损伤过程中软骨细胞未发生变性,少量损伤的软骨组织仍可获得适量软骨细胞,MTT法和电镜扫描表明,其生长活性符合自体软骨细胞移植的要求,无需取正常软骨组织作为细胞来源。
【文章来源】：中国现代医学杂志. 2017,27(23)北大核心
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
关节镜下软骨损伤区19·
中国现代医学杂志第27卷实验组对照组图3两组第3代细胞（甲苯胺蓝染色×400）验组和对照组进行比较是否符合软骨细胞生长特性,实验组应注意观察有无长梭形的纤维样细胞。1.2.5甲苯胺蓝染色鉴定将实验组培养至第2代的细胞传代后，放入含盖玻片的培养皿中培养24h。PBS缓冲液清洗爬片2次，4%多聚甲醛溶液固定15～20min、0.1%甲苯胺蓝染液浸泡2h，90%无水乙醇漂洗，镜下观察。1.2.6MTT法为保证足够数量的细胞完成实验，实验组和对照组细胞第2、3代测吸光度值（opticaldensity，OD），每代细胞均按2×104个/ml接种至6块96孔板，100μg（/ml·孔），每板分为实验组和对照组，每组接种6孔。每隔2天换液，每隔1天取1块96孔板分别测实验组和对照组每孔OD值,测1次/（板·孔），共测6次。加入MTT溶液（5mg/ml）10μl/孔，培养箱孵育4h后加入100μlDMSO，在摇床上低速震荡10min，在酶联免疫吸附检测仪490nm处测各孔吸光度值，取每组平均值。1.2.7电镜电镜观察比较两组细胞生长情况。两组细胞分别取第3代细胞，接种至含有Ⅰ/Ⅱ型复合胶原膜的培养皿中培养3d[7]，细胞悬液铺满培养皿底。3d后，将复合胶原膜从培养皿中取出，PBS缓冲液漂洗，2.5%戊二醛、1%锇酸双固定，浓度逐级增高的乙醇脱水、临界点干燥，喷金导电后扫描电镜观察。1.3统计学方法数据分析采用SPSS16.0统计软件，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，用两独立样本的t检验，P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1软骨细胞计数及存活率实验组软骨重量约为85mg，细胞浓度约为2.7136×104个/ml；对照组软骨重量约为85mg，细胞浓度约为3.5248×104个/ml；从软骨组织中获得细胞比率：实验组∶对照组的细胞提取比率1.0000∶1.2989。实验组台盼蓝染色测定细胞
中国现代医学杂志第27卷实验组对照组图3两组第3代细胞（甲苯胺蓝染色×400）验组和对照组进行比较是否符合软骨细胞生长特性,实验组应注意观察有无长梭形的纤维样细胞。1.2.5甲苯胺蓝染色鉴定将实验组培养至第2代的细胞传代后，放入含盖玻片的培养皿中培养24h。PBS缓冲液清洗爬片2次，4%多聚甲醛溶液固定15～20min、0.1%甲苯胺蓝染液浸泡2h，90%无水乙醇漂洗，镜下观察。1.2.6MTT法为保证足够数量的细胞完成实验，实验组和对照组细胞第2、3代测吸光度值（opticaldensity，OD），每代细胞均按2×104个/ml接种至6块96孔板，100μg（/ml·孔），每板分为实验组和对照组，每组接种6孔。每隔2天换液，每隔1天取1块96孔板分别测实验组和对照组每孔OD值,测1次/（板·孔），共测6次。加入MTT溶液（5mg/ml）10μl/孔，培养箱孵育4h后加入100μlDMSO，在摇床上低速震荡10min，在酶联免疫吸附检测仪490nm处测各孔吸光度值，取每组平均值。1.2.7电镜电镜观察比较两组细胞生长情况。两组细胞分别取第3代细胞，接种至含有Ⅰ/Ⅱ型复合胶原膜的培养皿中培养3d[7]，细胞悬液铺满培养皿底。3d后，将复合胶原膜从培养皿中取出，PBS缓冲液漂洗，2.5%戊二醛、1%锇酸双固定，浓度逐级增高的乙醇脱水、临界点干燥，喷金导电后扫描电镜观察。1.3统计学方法数据分析采用SPSS16.0统计软件，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，用两独立样本的t检验，P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1软骨细胞计数及存活率实验组软骨重量约为85mg，细胞浓度约为2.7136×104个/ml；对照组软骨重量约为85mg，细胞浓度约为3.5248×104个/ml；从软骨组织中获得细胞比率：实验组∶对照组的细胞提取比率1.0000∶1.2989。实验组台盼蓝染色测定细胞
【参考文献】：
期刊论文
[1]软骨组织工程软骨细胞分离方式的优化[J]. 邵博,占琼,龚忠诚,宁晓婷,杨萌,王玥,胡鑫,高芸竹,林兆全. 新疆医科大学学报. 2016(09)
[2]兔软骨细胞的分离及其与Ⅰ/Ⅱ型复合胶原膜共培养实验研究[J]. 丛波,张加廷,韩龙,丁一,徐训安,姚旺林,张仲文. 中国现代医学杂志. 2016(07)
[3]Mesenchymal stem cells as a potent cell source for articular cartilage regeneration[J]. Mohamadreza Baghaban Eslaminejad,Elham Malakooty Poor. World Journal of Stem Cells. 2014(03)
[4]新西兰兔关节软骨细胞分离培养与鉴定的实验研究[J]. 刘小荣,张笠,高武,卢青云,孟研. 国际检验医学杂志. 2012(19)
[5]人关节软骨细胞的体外分离、培养与鉴定[J]. 童迅,赵海恩,张栋,赵新文,曾照辉,马保安. 现代生物医学进展. 2012(16)
[6]胰蛋白酶及Ⅱ型胶原酶消化获取关节软骨细胞[J]. 刘明东,盛天金,王万宗. 中国组织工程研究与临床康复. 2010(46)
[7]兔关节软骨细胞聚集培养的生物学性状观察[J]. 余方圆,卢世璧,崔雪梅,赵斌,许文静,袁玫,孙明学,张文涛,黄靖香. 中华外科杂志. 2006(12)
本文编号：3577147
【文章来源】：中国现代医学杂志. 2017,27(23)北大核心
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
关节镜下软骨损伤区19·
中国现代医学杂志第27卷实验组对照组图3两组第3代细胞（甲苯胺蓝染色×400）验组和对照组进行比较是否符合软骨细胞生长特性,实验组应注意观察有无长梭形的纤维样细胞。1.2.5甲苯胺蓝染色鉴定将实验组培养至第2代的细胞传代后，放入含盖玻片的培养皿中培养24h。PBS缓冲液清洗爬片2次，4%多聚甲醛溶液固定15～20min、0.1%甲苯胺蓝染液浸泡2h，90%无水乙醇漂洗，镜下观察。1.2.6MTT法为保证足够数量的细胞完成实验，实验组和对照组细胞第2、3代测吸光度值（opticaldensity，OD），每代细胞均按2×104个/ml接种至6块96孔板，100μg（/ml·孔），每板分为实验组和对照组，每组接种6孔。每隔2天换液，每隔1天取1块96孔板分别测实验组和对照组每孔OD值,测1次/（板·孔），共测6次。加入MTT溶液（5mg/ml）10μl/孔，培养箱孵育4h后加入100μlDMSO，在摇床上低速震荡10min，在酶联免疫吸附检测仪490nm处测各孔吸光度值，取每组平均值。1.2.7电镜电镜观察比较两组细胞生长情况。两组细胞分别取第3代细胞，接种至含有Ⅰ/Ⅱ型复合胶原膜的培养皿中培养3d[7]，细胞悬液铺满培养皿底。3d后，将复合胶原膜从培养皿中取出，PBS缓冲液漂洗，2.5%戊二醛、1%锇酸双固定，浓度逐级增高的乙醇脱水、临界点干燥，喷金导电后扫描电镜观察。1.3统计学方法数据分析采用SPSS16.0统计软件，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，用两独立样本的t检验，P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1软骨细胞计数及存活率实验组软骨重量约为85mg，细胞浓度约为2.7136×104个/ml；对照组软骨重量约为85mg，细胞浓度约为3.5248×104个/ml；从软骨组织中获得细胞比率：实验组∶对照组的细胞提取比率1.0000∶1.2989。实验组台盼蓝染色测定细胞
中国现代医学杂志第27卷实验组对照组图3两组第3代细胞（甲苯胺蓝染色×400）验组和对照组进行比较是否符合软骨细胞生长特性,实验组应注意观察有无长梭形的纤维样细胞。1.2.5甲苯胺蓝染色鉴定将实验组培养至第2代的细胞传代后，放入含盖玻片的培养皿中培养24h。PBS缓冲液清洗爬片2次，4%多聚甲醛溶液固定15～20min、0.1%甲苯胺蓝染液浸泡2h，90%无水乙醇漂洗，镜下观察。1.2.6MTT法为保证足够数量的细胞完成实验，实验组和对照组细胞第2、3代测吸光度值（opticaldensity，OD），每代细胞均按2×104个/ml接种至6块96孔板，100μg（/ml·孔），每板分为实验组和对照组，每组接种6孔。每隔2天换液，每隔1天取1块96孔板分别测实验组和对照组每孔OD值,测1次/（板·孔），共测6次。加入MTT溶液（5mg/ml）10μl/孔，培养箱孵育4h后加入100μlDMSO，在摇床上低速震荡10min，在酶联免疫吸附检测仪490nm处测各孔吸光度值，取每组平均值。1.2.7电镜电镜观察比较两组细胞生长情况。两组细胞分别取第3代细胞，接种至含有Ⅰ/Ⅱ型复合胶原膜的培养皿中培养3d[7]，细胞悬液铺满培养皿底。3d后，将复合胶原膜从培养皿中取出，PBS缓冲液漂洗，2.5%戊二醛、1%锇酸双固定，浓度逐级增高的乙醇脱水、临界点干燥，喷金导电后扫描电镜观察。1.3统计学方法数据分析采用SPSS16.0统计软件，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，用两独立样本的t检验，P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1软骨细胞计数及存活率实验组软骨重量约为85mg，细胞浓度约为2.7136×104个/ml；对照组软骨重量约为85mg，细胞浓度约为3.5248×104个/ml；从软骨组织中获得细胞比率：实验组∶对照组的细胞提取比率1.0000∶1.2989。实验组台盼蓝染色测定细胞
【参考文献】：
期刊论文
[1]软骨组织工程软骨细胞分离方式的优化[J]. 邵博,占琼,龚忠诚,宁晓婷,杨萌,王玥,胡鑫,高芸竹,林兆全. 新疆医科大学学报. 2016(09)
[2]兔软骨细胞的分离及其与Ⅰ/Ⅱ型复合胶原膜共培养实验研究[J]. 丛波,张加廷,韩龙,丁一,徐训安,姚旺林,张仲文. 中国现代医学杂志. 2016(07)
[3]Mesenchymal stem cells as a potent cell source for articular cartilage regeneration[J]. Mohamadreza Baghaban Eslaminejad,Elham Malakooty Poor. World Journal of Stem Cells. 2014(03)
[4]新西兰兔关节软骨细胞分离培养与鉴定的实验研究[J]. 刘小荣,张笠,高武,卢青云,孟研. 国际检验医学杂志. 2012(19)
[5]人关节软骨细胞的体外分离、培养与鉴定[J]. 童迅,赵海恩,张栋,赵新文,曾照辉,马保安. 现代生物医学进展. 2012(16)
[6]胰蛋白酶及Ⅱ型胶原酶消化获取关节软骨细胞[J]. 刘明东,盛天金,王万宗. 中国组织工程研究与临床康复. 2010(46)
[7]兔关节软骨细胞聚集培养的生物学性状观察[J]. 余方圆,卢世璧,崔雪梅,赵斌,许文静,袁玫,孙明学,张文涛,黄靖香. 中华外科杂志. 2006(12)
本文编号：3577147
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