黄毛草莓编码NB-ARC结构域的FnCN基因和启动子克隆及FnCN基因表达分析

发布时间：2024-05-27 05:06

　　利用同源克隆技术得到黄毛草莓(Fragaria nilgerrensis Schlecht. ex Gay)中编码NB-ARC结构域的抗病相关基因FnCN及启动子序列。序列分析结果表明:FnCN基因开放阅读框的长度为933 bp(GenBank登录号MN240290),编码310个氨基酸残基,其N端有1个Rx-CC结构域,C端有1个保守的NB-ARC结构域。该基因起始密码子上游启动子pFnCN序列的长度为910 bp(GenBank登录号MN240291),包含TATA-box、CAAT-box、激素响应元件、干旱诱导MYB结合位点、光响应元件和厌氧诱导顺式作用元件等。氨基酸序列的同源性比对结果表明:黄毛草莓FnCN基因与野草莓(Fragaria vesca Linn.)CN基因编码氨基酸序列的相似性最高(95.16%)。成功构建了黄毛草莓FnCN基因的植物过表达载体pCAMBIA1301-HA-FnCN和病毒诱导基因沉默载体pTRV2-FnCN。实时荧光定量PCR检测结果表明:黄毛草莓叶片接种胶孢炭疽菌[Colletotrichum gloeosporioides(Penz.) Sa...

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图1黄毛草莓FnCN基因的PCR扩增结果

根据获得的黄毛草莓转录组数据与野草莓(FragariavescaLinn.)相同的unigene,通过Primer5.0软件设计,利用引物FnCN-F和FnCN-R,以黄毛草莓叶片cDNA为模板进行PCR扩增,得到1个长度约1000bp的条带(图1)。然后进行连接转化、....

图2黄毛草莓FnCN基因的核苷酸序列及其编码的氨基酸序列

图1黄毛草莓FnCN基因的PCR扩增结果2.1.2启动子克隆及序列分析

图3黄毛草莓FnCN基因启动子的PCR扩增结果

利用引物P-FnCN-F和P-FnCN-R从黄毛草莓基因组DNA中扩增得到1个长度约900bp的启动子条带(图3)。测序结果显示,该启动子序列的长度为910bp,命名为pFnCN(GenBank登录号MN240291)。利用PlantCARE数据库对该序列进行顺式作用元件预测....

图4黄毛草莓FnCN基因启动子序列及其顺式作用元件

图3黄毛草莓FnCN基因启动子的PCR扩增结果2.2黄毛草莓FnCN基因编码氨基酸序列的理化性质及同源性分析

本文编号：3982810