利用病毒诱导的基因沉默技术（VIGS）解析受体类激酶GmFLS2与GmBAK1在大豆抗病中的作用
发布时间：2021-11-06 21:23
在拟南芥中,位于细胞质膜上的受体类激酶（receptor-like kinase,RLKs）识别病原菌相关蛋白、启动防御反应。FLS2（FLAGELLIN SENSING 2）作为最早克隆的RLKs,它能够识别细菌鞭毛蛋白N端的由22个氨基酸组成的肽段（flg22）;BAK1（BRI1-ASSOCIATEDKINASE1）是 FLS2 的共受体（co-receptor）,它通常与 FLS2 或其他PRRs结合形成二聚体识别病原菌中的配体。虽然RLKs在拟南芥中的研究相对较为详细,但在作物中的研究才刚刚开始。本研究利用菜豆豆荚斑驳病毒（Beanpod mottlevirus,BPMV）诱导的基因沉默技术（BPMV-VIGS）分别沉默大豆GmFLS2和GmBAK1两个基因。经RT-PCR分析确证GmFLS2及GmBAK1的确被沉默后,对沉默株分别进行表型观察与鉴定。表型分析表明GmFLS2沉默株在表型上与空载体对照株无显著区别,但沉默GmBAK1后严重影响植株的生长,植株出现严重矮化,叶片表面出现HR细胞死亡（Hypersensitive response cell death）,茎部出现...
【文章来源】：浙江师范大学浙江省
【文章页数】：79 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
植物模式受体与配体结合的方式poi
图３．１?目的片段的扩增??Ｆｉｇ．?３．１?Ｔｈｅ?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＧｍＦＬＳ２??Ｍａｒｋｅｒ；?Ｇｌ：?Ｇｌｙｍａ０５ｇ２５８３０．１?基因片段，片段，片段大小为３８４ｂｐ。??
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【参考文献】：
期刊论文
[1]Plant pattern-recognition receptors controlling innate immunity[J]. Lei Li,Yufei Yu,Zhaoyang Zhou,Jian-Min Zhou. Science China（Life Sciences）. 2016(09)
[2]Receptor-Like Kinases:Key Regulators of Plant Development and Defense[J]. Jia Li,Frans E·Tax. Journal of Integrative Plant Biology. 2013(12)
[3]BAK1 Directly Regulates Brassinosteroid Perception and BRI1 Activation[J]. Kai He,Shengbao Xu,Jia Li. Journal of Integrative Plant Biology. 2013(12)
[4]Receptor-Like Kinases in Plant Innate Immunity[J]. Ying Wu,Jian-Min Zhou. Journal of Integrative Plant Biology. 2013(12)
[5]BAK1调控植物免疫信号识别和转导的分子机制[J]. 陈现朝,周永力. 植物遗传资源学报. 2013(06)
[6]水稻对白叶枯病和细菌性条斑病的抗性遗传研究进展[J]. 许美容,周永力,黎志康. 植物遗传资源学报. 2012(03)
[7]植物中CBL-CIPK途径转导特异Ca2+信号的分子机制[J]. 张成伟,王天宇,黎裕. 植物遗传资源学报. 2010(04)
[8]大豆5个花叶病毒株系抗性基因的定位[J]. 王永军,东方阳,王修强,杨雅麟,喻德跃,盖钧镒,吴晓雷,贺超英,张劲松,陈受宜. 遗传学报. 2004(01)
硕士论文
[1]EDS5及其同源基因EDS5-LIKE参与BAK1和BKK1介导的细胞死亡途径功能的探究[D]. 赵建新.兰州大学 2016
本文编号：3480548
【文章来源】：浙江师范大学浙江省
【文章页数】：79 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
植物模式受体与配体结合的方式poi
图３．１?目的片段的扩增??Ｆｉｇ．?３．１?Ｔｈｅ?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＧｍＦＬＳ２??Ｍａｒｋｅｒ；?Ｇｌ：?Ｇｌｙｍａ０５ｇ２５８３０．１?基因片段，片段，片段大小为３８４ｂｐ。??
?■??图３．?２?ＧｗｔＢＡＯ目的片段的扩增??Ｆｉｇ．?３．２?Ｔｈｅ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＧｍＢＡＫｌ??注?Ｍ：?ＤＭ２０００ＤＮＡＭａｒｋｅｒ；?Ｇ３：?Ｇｌｙｍａｌ８ｇ４８１７０．１?基因片段，片段大小为?４７２ｂｐ；?Ｇ４：??Ｇｌｙｍａ０９ｇ３８２２０．１，基因片段片段大小为４８１ｂｐ。??（３）将得到的目的片段进行酶切，连接，热激转化后构建得到沉默载体。为??了确保得到的沉默载体正确，首先需进行菌落ＰＣＲ验证初步确定目的片段已经成??功的克隆至载体（图３．３?Ａ，Ｃ）然后提取验证正确的单克隆菌落的质粒进行及酶切??验证分析再次证明沉默载体构建成功（图３．３?Ｂ，Ｄ）。综合这两方面的结果我们基??本可以确定已经得到了正确的沉默载体，最后为了保证碱基序列没有发生点突变，??将得到的载体送去基因公司测序
【参考文献】：
期刊论文
[1]Plant pattern-recognition receptors controlling innate immunity[J]. Lei Li,Yufei Yu,Zhaoyang Zhou,Jian-Min Zhou. Science China（Life Sciences）. 2016(09)
[2]Receptor-Like Kinases:Key Regulators of Plant Development and Defense[J]. Jia Li,Frans E·Tax. Journal of Integrative Plant Biology. 2013(12)
[3]BAK1 Directly Regulates Brassinosteroid Perception and BRI1 Activation[J]. Kai He,Shengbao Xu,Jia Li. Journal of Integrative Plant Biology. 2013(12)
[4]Receptor-Like Kinases in Plant Innate Immunity[J]. Ying Wu,Jian-Min Zhou. Journal of Integrative Plant Biology. 2013(12)
[5]BAK1调控植物免疫信号识别和转导的分子机制[J]. 陈现朝,周永力. 植物遗传资源学报. 2013(06)
[6]水稻对白叶枯病和细菌性条斑病的抗性遗传研究进展[J]. 许美容,周永力,黎志康. 植物遗传资源学报. 2012(03)
[7]植物中CBL-CIPK途径转导特异Ca2+信号的分子机制[J]. 张成伟,王天宇,黎裕. 植物遗传资源学报. 2010(04)
[8]大豆5个花叶病毒株系抗性基因的定位[J]. 王永军,东方阳,王修强,杨雅麟,喻德跃,盖钧镒,吴晓雷,贺超英,张劲松,陈受宜. 遗传学报. 2004(01)
硕士论文
[1]EDS5及其同源基因EDS5-LIKE参与BAK1和BKK1介导的细胞死亡途径功能的探究[D]. 赵建新.兰州大学 2016
本文编号：3480548
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/dzwbhlw/3480548.html
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