草地贪夜蛾半胱氨酸蛋白酶Sf-caspase-3基因克隆与表达分析

发布时间：2024-05-08 05:31

　　半胱氨酸蛋白酶(caspases)是细胞凋亡过程中重要的酶类,参与调控昆虫变态发育及响应外界压力等多种生理过程。本研究通过转录组数据及逆转录PCR鉴定并验证得到草地贪夜蛾Spodoptera frugiperdaSf-caspase-3基因编码区全长。该基因编码区长840 bp,编码279个氨基酸,预测蛋白分子量为31.43 kDa。氨基酸序列分析表明Sf-caspase-3具有保守的QACRG五肽序列,且与Lep-caspase-3高度保守。进化树分析表明Sf-caspase-3与甜菜夜蛾Spodoptera exigua Se-caspase-3亲缘关系最近。RT-qPCR检测结果表明Sf-caspase-3在草地贪夜蛾各个龄期均有表达,其中3～6龄幼虫期表达量最高,蛹期和卵期表达量最低。此外Sf-caspase-3在6龄幼虫中肠组织中表达量最高,而在表皮、脂肪体及马氏管中表达量极低。本研究成功构建Sf-caspase-3原核表达重组质粒,在28℃下0.4 mmol/L异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组菌株4 h得到约50 kDa大小条带,与预期条带大小相符。蛋白可溶性分析表明...

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图5Sf-caspase-3在草地贪夜蛾不同发育时期及6龄幼虫不同组织中mRNA水平相对表达量

图4草地贪夜蛾Sf-caspase-3蛋白三级结构预测图6Sf-caspase-3在大肠杆菌中诱导表达及可溶性分析

图6Sf-caspase-3在大肠杆菌中诱导表达及可溶性分析

图5Sf-caspase-3在草地贪夜蛾不同发育时期及6龄幼虫不同组织中mRNA水平相对表达量3结论与讨论

图1Sf-caspase-3基因编码区序列及其对应的氨基酸序列

通过Blast比对成功鉴定得到Sf-caspase-3基因序列编码区全长。Sf-caspase-3基因编码区长840bp,编码279个氨基酸,ExPASy预测Sf-caspase-3编码蛋白分子量大小为31.43kDa,等电点为6.50,预测分子式为C1397H2206N37....

图2Sf-caspase-3与其他鳞翅目昆虫caspase-3多重序列比对结果

转化重组质粒pET32a-Sf-caspase-3的大肠杆菌经IPTG诱导后进行SDS-PAGE电泳检测。结果表明未加入IPTG诱导的样品中没有明显的目标蛋白条带出现,而IPTG诱导的样品中出现明显蛋白条带,且大小约为50kDa,与预测的蛋白大小基本相符(图6)。上述结果表明S....

本文编号：3967568