几株优良内生菌的分离及鉴定

发布时间：2023-05-20 00:18

　　植物内生菌是一类种类繁多、在植物体内作用广泛(促进植物生长、抵抗病害等)、易于定殖、发挥作用持久的微生物资源。为筛选到优良抗病促生内生微生物应用于上海生态林,本文分别从樟树、樱花、水杉三个树种的组织内用组织切片和组织匀浆法进行内生菌的分离。在分离到的内生菌中筛选出对植物病原具有拮抗作用及有解磷固氮能力的菌株;同时对菌株的耐盐性进行研究;再对筛选获得的优良菌株进行鉴定;并用绿色荧光蛋白基因标记的方法研究优良菌株在树体内的定殖规律;此外,选用本实验室前人筛选获得的优良菌株在上海生态林上进行菌株的田间抗病促生效应分析试验。主要结果如下:1.从樟树组织内分离到50株细菌、3株真菌。通过平板对抗实验筛选到5株对壳梭孢溃疡病病原菌(Fusicoccum sp.)有拮抗作用、6株对拟盘多毛孢枯枝病病原菌(Pestalotiopsis sp.)有拮抗作用、9株对拟茎点溃疡病病原菌(Phomopsis sp.)有拮抗作用的内生细菌。其中,菌株ZS-37及菌株ZS-3对三种病原菌都有拮抗作用,菌株ZS-1对壳梭孢溃疡病病原菌和拟茎点溃疡病病原菌两种病原菌有较好的拮抗效果,菌株ZS-26及菌株ZS-30对拟...

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致谢
摘要
Abstract
前言
第一章 文献综述
    1 上海生态林概况
        1.1 樟树病虫害研究概述
        1.2 樱花病虫害研究概述
        1.3 水杉病虫害研究概述
        1.4 杨树病虫害研究概述
    2 植物内生菌研究进展
        2.1 植物内生菌的定义
        2.2 植物内生菌的分布及多样性
        2.3 内生菌的作用
        2.4 内生菌分离与优良菌株筛选
        2.5 内生菌防治植物病害的潜在风险
        2.6 植物内生菌的应用前景
第二章 三种树种内生菌的分离纯化及拮抗菌的筛选
    1 材料与方法
        1.1 供试培养基
        1.2 样品采集与表面预处理
            1.2.1 样品的采集
        1.3 组织切片法分离枝部内生菌
        1.4 组织匀浆法分离叶部内生菌
        1.5 内生菌的纯化和保存
        1.6 内生拮抗细菌的筛选
            1.6.1 樟树内生拮抗细菌的筛选
            1.6.2 樱花内生拮抗细菌的筛选
            1.6.3 水杉内生拮抗菌的筛选
    2 结果与分析
        2.1 香樟内生菌的分离纯化及拮抗菌的筛选结果
            2.1.1 香樟内生菌的分离结果
            2.1.2 樟树抑菌内生细菌的筛选结果
        2.2 樱花内生菌分离纯化及拮抗菌的筛选结果
            2.2.1 樱花内生菌的分离结果
            2.2.2 樱花抑菌内生菌的筛选结果
        2.3 水杉内生菌分离纯化及拮抗菌的筛选结果
            2.3.1 水杉内生菌的分离结果
            2.3.2 水杉抑菌内生菌的筛选结果
    3 结论与讨论
第三章 内生细菌的解磷、固氮和耐盐性研究
    1 材料与方法
        1.1 供试培养基
        1.2 内生细菌解磷能力的研究
            1.2.1 解磷菌的初步筛选
            1.2.2 内生菌 24h解磷能力的测定
        1.3 菌株固氮能力初步测定
        1.4 菌株的耐盐性的测定
    2 结果与分析
        2.1 内生菌株解磷能力的初步测定
        2.2 内生菌株固氮能力的初步检测
        2.3 内生菌耐盐性检测结果
    3 结论与讨论
第四章 三株优良内生菌株的种类鉴定
    1 材料与方法
        1.1 三株优良内生菌株的形态学观察
        1.2 三株优良内生菌株的常规生理生化性状的鉴定
        1.3 三株优良内生菌株的 16S rDNA基因序列测定及系统发育分析
    2 结果与分析
        2.1 三株优良内生菌株的形态学观察
        2.2 三株优良内生菌的生理生化特性
        2.3 三株优良内生菌 16SrDNA测序结果及系统发育树构建
            2.3.1 三株优良内生菌 16SrDNA基因序列扩增产物分析
            2.3.2 三株优势菌的 16SrDNA基因序列测定结果
        2.4 菌株的系统发育分布
    3 结论与讨论
第五章 优良内生菌株的内生定殖规律的研究
    1 材料与方法
        1.1 材料与仪器
        1.2 菌株和质粒
        1.3 标记菌株的构建
        1.4 标记菌株的观察
        1.5 标记菌株的稳定性测试
        1.6 标记菌株的体内定殖
    2 结果与分析
        2.1 三株标记菌株的观察结果
        2.2 标记菌株的稳定性
        2.3 标记菌株在树体内的定殖结果
    3 结论与讨论
第六章 全文总结与展望
    1 全文总结
    2 展望
参考文献
附录 几株优良菌株在杨树、樟树、樱花及东方杉上的田间抗病促生效应
    1 试验方案及实验材料
        1.1 几株优良菌株在杨树上的田间效应
            1.1.1 供试菌株
            1.1.2 培养基与液体菌剂的制备
            1.1.3 试验地概况
            1.1.4 试验方法
            1.1.5 试验设计
            1.1.7 杨树病虫害调查
            1.1.8 杨树生长量的测定
        1.2 几株优良菌株在樟树上的田间效应
            1.2.1 供试菌株
            1.2.2 培养基与液体菌剂的制备
            1.2.3 试验地概况
            1.2.4 试验方法
            1.2.5 试验设计
            1.2.6 樟树病虫害调查
            1.2.7 樟树生长量的测定
        1.3 几株优良菌株在樱花上的田间效应
            1.3.1 供试菌株
            1.3.2 培养基与液体菌剂的制备
            1.3.3 试验地概况
            1.3.4 试验方法
            1.3.5 试验设计
            1.3.6 樱花病虫害调查
        1.4 几株优良菌株在东方杉上的田间效应
            1.4.1 供试菌株
            1.4.2 培养基与液体菌剂的制备
            1.4.3 试验地概况
            1.4.4 试验方法
            1.4.5 试验设计
            1.4.6 东方杉生长量的测定
    2 结果与分析
        2.1 几株优良菌株在杨树上的田间效应
            2.1.1 几株优良菌在杨树病虫害防治上的效应
            2.1.2 各菌剂对杨树生长的影响
        2.2 几株优良菌株在樟树上的田间效应
            2.2.1 各菌剂对樟树病虫害的防治效应及苗木存活率的影响
            2.2.2 各菌剂对樟树生长量的影响
        2.3 几株优良菌株在樱花上的田间效应
        2.4 几株优良菌株在东方杉上的田间效应
            2.4.1 各菌剂对东方杉生长的影响
    3 结论与讨论



本文编号：3820172