基于转录组数据的嗜虫书虱P450基因的克隆与表达研究
发布时间：2025-06-19 03:48
嗜虫书虱Liposcelis entomophila(Enderlein)是一种重要的储藏物害虫,大量发生时可造成严重的经济损失,且对化学药剂的抗性发展迅速,已引起全世界储藏物工作者的高度重视。但与其他储藏物类害虫相比,关于嗜虫书虱抗性机理的研究鲜有报道。细胞色素P450是昆虫体内一种重要的解毒代谢酶,在昆虫的生命活动中具有重要的生理功能。本学位论文以嗜虫书虱为研究对象,围绕细胞色素P450介导昆虫代谢抗性这一科学问题开展研究工作。具体内容包括:测定嗜虫书虱对药剂的敏感性,明确不同种群的抗性水平;构建嗜虫书虱转录组数据库,筛选鉴定具有解毒代谢功能的基因信息;聚焦细胞色素P450基因,克隆cDNA全长序列,解析这些基因在不同性别、不同发育阶段以及药剂诱导后的表达模式;初步构建嗜虫书虱P450基因真核表达载体;从生化水平上比较相对抗性和相对敏感种群P450s的酶学特征。研究结果为探究细胞色素P450是否参与嗜虫书虱抗药性形成提供基础数据,在实践上为制定嗜虫书虱可持续的防控策略提供指导。主要研究结果如下:1嗜虫书虱转录组测序及解毒代谢酶基因的鉴定利用Illumina技术对嗜虫书虱全虫态进行转录...
【文章页数】：120 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 文献综述
1 转录组学在昆虫学研究中的应用
2 细胞色素P450酶系
2.1 细胞色素P450的结构特征
2.2 细胞色素P450的集团分类
2.3 细胞色素P450与害虫抗药性的关系
2.4 细胞色素P450在药剂胁迫下的可诱导性
2.5 昆虫杆状病毒表达系统在P450功能研究中的应用
3 书虱的危害及抗性研究概况
3.1 书虱的危害与抗性产生
3.2 书虱的抗性研究
引言
第二章 嗜虫书虱转录组测序与分析
1 材料与方法
1.1 供试虫源
1.2 供试主要试剂和仪器
1.3 总RNA的提取
1.4 嗜虫书虱转录组测序及数据分析
2 结果与分析
2.1 嗜虫书虱转录组测序及数据分析
2.2 功能注释
2.3 嗜虫书虱解毒代谢酶基因的鉴定及代谢通路分析
3 小结
第三章 嗜虫书虱细胞色素P450基因的克隆与表达研究
第一节 嗜虫书虱5个P450基因的克隆与信息分析
1 材料与方法
1.1 供试虫源
1.2 供试主要试剂（盒）和仪器
1.3 总RNA的提取
1.4 总RNA中gDNA的去除
1.5 cDNA的合成
1.6 引物设计
1.7 PCR扩增反应
1.8 嗜虫书虱P450基因序列及系统发育分析
2 结果与分析
2.1 嗜虫书虱P450基因cDNA全长的获得
2.2 嗜虫书虱P450基因cDNA序列的生物信息学分析
2.3 嗜虫书虱P450基因的同源性分析
2.4 嗜虫书虱P450的系统发育分析
3 小结
第二节 嗜虫书虱P450基因的时空表达分析
1 材料与方法
1.1 供试虫源
1.2 供试主要试剂（盒）和仪器
1.3 嗜虫书虱不同性别及不同发育阶段虫源的收集
1.4 生物测定及药剂诱导
1.5 总RNA的提取
1.6 总RNA中gDNA的去除
1.7 cDNA的合成
1.8 引物设计及内参基因选择
1.9 定量PCR
1.10 数据分析
2 结果与分析
2.1 嗜虫书虱不同性别P450基因的表达模式
2.2 嗜虫书虱不同发育阶段P450基因的表达模式
2.3 嗜虫书虱P450基因对药剂诱导的响应表达模式
2.4 嗜虫书虱P450基因在不同种群间的表达模式
3 小结
第三节 嗜虫书虱细胞色素P450基因真核表达载体构建
1 材料与方法
1.1 供试主要试剂（盒）和仪器
1.2 细胞培养
1.3 PCR扩增及p MD-19T Simple载体构建
1.4 表达载体构建
2 结果与分析
2.1 嗜虫书虱P450基因与p MD-19T Simple重组载体的构建
2.2 p FastBac-CYP4FD2重组质粒的构建
2.3 Bacmid-CYP4FD2重组杆粒的构建
3 小结
本章讨论
1 细胞色素P450基因的表达模式
2 细胞色素P450基因的真核表达
第四章 嗜虫书虱敏感与抗性种群P450酶活性的比较研究
1 材料与方法
1.1 供试主要试剂（盒）和仪器
1.2 嗜虫书虱的药剂诱导
1.3 定量PCR
1.4 增效作用测定
1.5 P450s活性测定
1.6 数据分析
2 结果与分析
2.1 嗜虫书虱敏感和抗性种群药剂敏感性及增效作用测定
2.2 嗜虫书虱P450基因在不同种群的定量表达研究
2.3 嗜虫书虱不同种群P450酶活性测定与比较分析
2.4 嗜虫书虱敏感种群在不同药剂胁迫后的P450酶的活性测定
3 小结
第五章 主要结果、结论与研究展望
1 主要结果与结论
2 研究展望
参考文献
在读期间发表论文情况
致谢
本文编号：4050809
【文章页数】：120 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 文献综述
1 转录组学在昆虫学研究中的应用
2 细胞色素P450酶系
2.1 细胞色素P450的结构特征
2.2 细胞色素P450的集团分类
2.3 细胞色素P450与害虫抗药性的关系
2.4 细胞色素P450在药剂胁迫下的可诱导性
2.5 昆虫杆状病毒表达系统在P450功能研究中的应用
3 书虱的危害及抗性研究概况
3.1 书虱的危害与抗性产生
3.2 书虱的抗性研究
引言
第二章 嗜虫书虱转录组测序与分析
1 材料与方法
1.1 供试虫源
1.2 供试主要试剂和仪器
1.3 总RNA的提取
1.4 嗜虫书虱转录组测序及数据分析
2 结果与分析
2.1 嗜虫书虱转录组测序及数据分析
2.2 功能注释
2.3 嗜虫书虱解毒代谢酶基因的鉴定及代谢通路分析
3 小结
第三章 嗜虫书虱细胞色素P450基因的克隆与表达研究
第一节 嗜虫书虱5个P450基因的克隆与信息分析
1 材料与方法
1.1 供试虫源
1.2 供试主要试剂（盒）和仪器
1.3 总RNA的提取
1.4 总RNA中gDNA的去除
1.5 cDNA的合成
1.6 引物设计
1.7 PCR扩增反应
1.8 嗜虫书虱P450基因序列及系统发育分析
2 结果与分析
2.1 嗜虫书虱P450基因cDNA全长的获得
2.2 嗜虫书虱P450基因cDNA序列的生物信息学分析
2.3 嗜虫书虱P450基因的同源性分析
2.4 嗜虫书虱P450的系统发育分析
3 小结
第二节 嗜虫书虱P450基因的时空表达分析
1 材料与方法
1.1 供试虫源
1.2 供试主要试剂（盒）和仪器
1.3 嗜虫书虱不同性别及不同发育阶段虫源的收集
1.4 生物测定及药剂诱导
1.5 总RNA的提取
1.6 总RNA中gDNA的去除
1.7 cDNA的合成
1.8 引物设计及内参基因选择
1.9 定量PCR
1.10 数据分析
2 结果与分析
2.1 嗜虫书虱不同性别P450基因的表达模式
2.2 嗜虫书虱不同发育阶段P450基因的表达模式
2.3 嗜虫书虱P450基因对药剂诱导的响应表达模式
2.4 嗜虫书虱P450基因在不同种群间的表达模式
3 小结
第三节 嗜虫书虱细胞色素P450基因真核表达载体构建
1 材料与方法
1.1 供试主要试剂（盒）和仪器
1.2 细胞培养
1.3 PCR扩增及p MD-19T Simple载体构建
1.4 表达载体构建
2 结果与分析
2.1 嗜虫书虱P450基因与p MD-19T Simple重组载体的构建
2.2 p FastBac-CYP4FD2重组质粒的构建
2.3 Bacmid-CYP4FD2重组杆粒的构建
3 小结
本章讨论
1 细胞色素P450基因的表达模式
2 细胞色素P450基因的真核表达
第四章 嗜虫书虱敏感与抗性种群P450酶活性的比较研究
1 材料与方法
1.1 供试主要试剂（盒）和仪器
1.2 嗜虫书虱的药剂诱导
1.3 定量PCR
1.4 增效作用测定
1.5 P450s活性测定
1.6 数据分析
2 结果与分析
2.1 嗜虫书虱敏感和抗性种群药剂敏感性及增效作用测定
2.2 嗜虫书虱P450基因在不同种群的定量表达研究
2.3 嗜虫书虱不同种群P450酶活性测定与比较分析
2.4 嗜虫书虱敏感种群在不同药剂胁迫后的P450酶的活性测定
3 小结
第五章 主要结果、结论与研究展望
1 主要结果与结论
2 研究展望
参考文献
在读期间发表论文情况
致谢
本文编号：4050809
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