烟草毛状根与幼套近明球囊霉双重培养体系的建立

发布时间：2025-07-02 02:15

　　丛枝菌根真菌（Arbuscular Mycorrhizal Fungus,AM）能与植物根系形成互惠共生体,促进植物生长发育,改善矿质营养,提高抗逆性等,在农业和林业上有着广泛的应用前景,但AM真菌是专性活体营养微生物,至今无法实现离体纯培养。本试验以烟草品种NC82、Va116为宿主植物,获得烟草无菌苗;用发根农杆菌C58C1、A4侵染受伤叶片,获得烟草Ri T-DNA转型根（毛状根）,筛选发根农杆菌菌种和烟草品种最佳组合;对几种AM真菌孢子进行形态学和分子生物学鉴定,孢子的消毒、萌发、筛选较好的消毒处理;将萌发的几种AM真菌孢子与烟草毛状根共培养,对共生培养体系进行了检测。获得以下结果:1、NC82和Va116烟草种子采用75%乙醇消毒60s,再10%次氯酸钠消毒15min,无菌水冲洗3次,接种于MS固体培养基,25℃恒温培养,萌发效果最好,萌发率高达到80%以上,污染率小于15%。2、当发根农杆菌A4、C58C1菌液OD₆₀₀值在0.6～0.8时,侵染烟草NC82、Va116无菌苗的叶片,发根农杆菌A4对NC82、Va116的诱导率分别为23.33%、21.4...

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【部分图文】：

图1-1丛枝菌根结构模式图(引自麻锦敏,2010)

根外菌丝进入植物细胞后形成了根内菌丝,而根内菌丝在植物细胞中进过连续的分支形成的一种灌木状结构,我们称之为丛枝。丛枝能够从宿主植物获取营养的结构,帮助AM真菌生长发育,因此丛枝是AM真菌至关重要的结构。丛枝在宿主体内不能存活太长的时间,一般在2～3周后被降解,被降解的丛枝其细胞质....

图2-1毛状根诱导率

从图2-1中可以看出,不同的发根农杆菌对不同的烟草品种其侵染率不同。在菌液OD600值为0.6～0.8,侵染时间9～10min情况下,用发根农杆菌A4、C58C1对烟草品种Va116、NC82进行诱导,均能诱导出毛状根,其诱导率分别为21.43%、23.33%、70.97%、35....

图2-2烟草毛状根rol B基因的PCR检测

(2)分子鉴定:用rolB基因序列的特异性引物(741bp),对发根农杆菌C58C1、A4诱导烟草NC82、Va116产生的毛状根DNA进行PCR检测。其扩增反应产物结果如图2-2,在诱导产生的毛状根基因组DNA中都检测出了扩增长度为741bp特异性条带。表明发根农杆菌C58C....

图3-1基于18S r DNA AML1-AML2区序列的系统发育树

登录NCBI将序列提交GenBank,获取的登录号为:MT478166、MT476855、MT473234,进行BLAST比对后,下载与这两条序列相似性达98%以上的序列,以Glomus、Claroideoglomus、Acaulospora的菌种序列作为分析序列,用Apiot....

本文编号：4055066