马氏珠母贝胆碱能免疫调节系统的初步研究

发布时间：2023-04-22 21:01

　　神经递质乙酰胆碱通过胆碱能免疫调节系统抑制炎症因子的释放,参与调控机体的免疫反应。课题组前期研究发现,马氏珠母贝血细胞中烟碱型乙酰胆碱受体在插核后有显著性上调,说明胆碱能免疫调节系统参与调控珍珠贝插核后的免疫反应。为了阐明其作用机制,本研究通过分析马氏珠母贝基因组和转录组数据,筛选出胆碱能免疫调节系统的关键基因,并进行基因克隆、表达、细胞定位和表达调控机制分析。主要研究结果如下:(1)乙酰胆碱受体基因的克隆和定量分析:克隆获得马氏珠母贝6个烟碱型乙酰胆碱受体基因(PmnAChRα1、PmnAChRα2、PmnAChRα3、PmnAChRα4、PmnAChRα5和PmnAChRα6)的cDNA全长序列,分别编码465、446、445、420、456和438个氨基酸。6个基因均具有4个典型的跨膜结构域(TM)、半胱氨酸环(Cys^loop)以及保守的胞外段配体结合区域(LBD)。Real-time PCR技术分析显示6个基因在珍珠贝的各个组织中均有分布,鳃中表达量最高;原位杂交表明,6个基因均在不同血细胞中呈现特异性表达,根据血细胞的分类标准,我们推测PmnAChRα1...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
1 前言
    1.1 珍珠贝的免疫机制概述
    1.2 胆碱能免疫调节系统的作用机制
        1.2.1 胆碱能系统的分子组成
        1.2.2 胆碱能系统的抑炎作用
    1.3 胆碱能免疫调节系统的研究进展
    1.4 胆碱能免疫调节系统与microRNA的关系
    1.5 研究目的和意义
2 实验材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验用贝及菌株
        2.1.2 实验主要仪器
        2.1.3 实验主要试剂及耗材
        2.1.4 实验所需溶液及培养基的配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 乙酰胆碱受体基因的筛选及预测
        2.2.2 乙酰胆碱受体基因的克隆
        2.2.3 生物信息学分析
        2.2.4 乙酰胆碱受体基因的表达分析
        2.2.5 胆碱能免疫调节机制（NF-kB信号通路）
        2.2.6 胆碱能系统的损伤修复作用
        2.2.7 乙酰胆碱受体基因在血细胞中的定位
        2.2.8 免疫microRNA对乙酰胆碱受体基因的调控分析
3 实验结果
    3.1 乙酰胆碱受体基因的克隆及序列分析
        3.1.1 PmnAChRα1 基因的克隆及序列分析
        3.1.2 PmnAChRα2 基因的克隆及序列分析
        3.1.3 PmnAChRα3 基因的克隆及序列分析
        3.1.4 PmnAChRα4 基因的克隆及序列分析
        3.1.5 PmnAChRα5 基因的克隆及序列分析
        3.1.6 PmnAChRα6 基因的克隆及序列分析
        3.1.7 马氏珠母贝乙酰胆碱受体基因的相似性和聚类分析
    3.2 乙酰胆碱受体基因的表达分析
        3.2.1 乙酰胆碱受体基因的组织定量分析
        3.2.2 乙酰胆碱受体基因在血细胞中的定位
        3.2.3 植核后 30d内乙酰胆碱受体基因在血淋巴中的时序表达
        3.2.4 LPS刺激后乙酰胆碱受体基因在血淋巴中的时序表达
        3.2.5 胆碱能免疫调节系统的抑炎作用机制（NF-kB信号通路）
        3.2.6 胆碱能系统的损伤修复作用
    3.3 乙酰胆碱受体基因的调控机制分析
        3.3.1 对乙酰胆碱受体基因具有调控作用的miRNA的筛选结果
        3.3.2 载体构建结果
        3.3.3 靶向关系验证
4 讨论
    4.1 乙酰胆碱受体基因的基本分子特征
    4.2 乙酰胆碱受体基因的表达分析
    4.3 胆碱能系统的免疫调节分析
    4.4 免疫miRNA对乙酰胆碱受体基因的调控分析
5 结论
参考文献
致谢
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导师简介



本文编号：3798386