牙鲆弹状病毒非结构蛋白（NV）的表达及抗原性初步分析

发布时间：2025-05-27 03:51

　　牙鲆弹状病毒(Hirame rhabdovirus,HRV)是弹状病毒科粒外弹状病毒属新成员,具有强烈的致病性,给全球海水养殖业造成了严重的经济损失。病毒在入侵宿主细胞的过程中,宿主细胞通过模式识别受体(pattern recognition receptors,PRRs)监测病原相关分子模式(pathogen associated molecular patterns,PAMPs)而感知病毒的入侵,并通过信号通路的级联传递,协调病毒感染早期宿主反应,并随即激活宿主获得性免疫反应。然而,通过和宿主的相互作用,RNA病毒进化出逃逸宿主RLRs免疫监视的不同策略来干扰宿主RLRs抗病毒信号,阻断RLRs信号的传导,从而导致宿主发病。多数情况下,病毒倾向于利用非结构蛋白进行此功能。而HRV致病机制及逃逸宿主免疫监视的分子机制还没有得到明确的阐述。本研究根据Gen Bank中HRV中国株全长基因序列设计特异性引物,用RT-PCR方法从病毒悬液中分段扩增HRV全长基因组序列,得到的基因序列拼接后,经BLAST比对发现与中国株的同源性达到99.77%,为后续获得感染性克隆奠定基础。根据Gen Ban...

【文章页数】：56 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
缩略语表
第一章 前言
    1 牙鲆弹状病毒概况
        1.1 发现及流行
        1.2 分类地位
        1.3 基因组编码蛋白特征
        1.4 HRV的检测方法
    2 宿主抗病毒感染的免疫机制
        2.1 宿主对RNA病毒的识别及免疫监视机制
        2.2 病毒逃逸宿主免疫监视的机制
    3 本文研究目的及意义
第二章 HRV全长基因组的扩增与分析
    1 材料与方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 结果
        2.1 HRV病毒的增殖
        2.2 HRV的RT-PCR鉴定
        2.3 HRV全长基因组序列的获得
    3 讨论
第三章 NV基因的扩增及序列分析
    1 材料与方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 结果
        2.1 NV基因的扩增及条件优化
        2.2 克隆质粒的鉴定及测序
        2.3 NV基因序列及编码蛋白的结构分析
    3 讨论
        3.1 NV基因的扩增及重组克隆
        3.2 NV蛋白的序列分析
第四章 HRV非结构蛋白的表达及其特性研究
    1 材料与方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 结果
        2.1 表达质粒的构建
        2.2 目的蛋白表达及IPTG浓度的优化
        2.3 抗HRV多克隆抗体效价的测定
        2.4 目的蛋白的Western-blotting检测
        2.5 间接ELISA检测表达蛋白
    3 讨论
结语
参考文献
附录 1
附录 2
攻读硕士学位期间发表的学术论文及课题资助
致谢



本文编号：4047465