两种猕猴桃病毒的分子特性研究

发布时间：2021-09-24 22:33

　　猕猴桃（Actinidia sp.）是我国重要的经济作物,已发现猕猴桃病毒病在我国有广泛的发生。为明确侵染猕猴桃的病毒种类及其分子生物学特性,本研究采用常规RT-PCR结合小RNA（sRNA）测序和RNA测序（RNA-seq）技术,对侵染猕猴桃的柑橘叶斑驳病毒（Citrus leaf blotch virus,CLBV）和一种新的长线型病毒科病毒进行了分子鉴定和分子特性研究,主要研究结果如下:1.2014-2015年,从湖北、云南、安徽、贵州、山东和福建6省份采集了 134株猕猴桃叶片样品,所收集样品多表现叶片褪绿斑驳、卷曲、花叶和脉黄等类似病毒病症状。采用CLBV特异性检测引物CLBV1F/CLBV5R进行该病毒的RT-PCR检测,17份样品的检测结果为阳性,平均检出率为12.7%,从中华猕猴桃、美味猕猴桃和其他杂交种或野生种上均检测到该病毒。2.设计了用于CLBV外壳蛋白基因（coat protein gene,cp）序列扩增的引物,测定了 5个CLBV分离物的完整cp序列,全长均为1092核苷酸（nt）,分离物间cp基因核苷酸和编码氨基酸序列相似性分别为83.2%-99.7%和9... 

【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：77 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１．１＜：１＾￥的基因组结构示意图（￥＾＾以《／．，２００１）??Ｍｔｒ：甲基转移酶，ＡｌｋＢ：烷烃羟化酶，Ｐ－Ｐｒｏ：类木瓜蛋白酶，Ｈｅｌ：解旋酶，ＲｄＲｐ：?ＲＮＡ聚合酶，ＭＰ：??

＿Ｇ７８?ａｒｅ?ｉｓｏｌａｔｅｓ?ｒｅｆｅｒｒｅｄ?ｆｒｏｍ?ＧｅｎＢａｎｋ．??在基于该病毒印基因核苷酸序列的系统进化树中（图２．１－Ａ），除Ｍ３－Ａ单独为??一分支外，本研宄所获得ＣＬＢＶ猕猴桃分离物与新西兰报道的猕猴桃其他分离物聚??为一组（组Ｉ），来自柑橘及其近缘种的分离物聚为另一组（组ＩＩ）。在组Ｉ中，ＡＨ１４??和Ｚ３与新西兰报道的猕猴桃分离物亲缘关系较近，ＡＨ１２，?Ｇ１５和ＡＨ１７则与这些??分离物亲缘关系较远。在基于该病毒ＣＰ氨基酸序列的系统进化树中（图２．１－Ｂ），??除来自柑橘及其近缘种的分离物聚在一组外

?华中农业大学２０１６届硕士研宄生学位（毕业）论文???第三章来源于称猴桃的ＣＬＢＶ全基因组序列测定??美国国家生物技术信息中心（ＮＣＢＩ）数据库中总共收录了?１０条ＣＬＢＶ的全基??因组序列，寄主分别来自法国柑橘、新西兰猕猴桃、美国德维脱桔橙、新西兰柑橘、??新西兰柠檬。根据ＲＴ－ＰＣＲ检测ＣＬＢＶ和序列分析结果，本研宄与己报道分离物序??列相似性较低，故本研宄选取感染ＣＬＢＶ分离物ＡＨ１７猕猴桃样品为材料，结合高??通量测序和常规ＲＴ－ＰＣＲ技术对该样品的ＣＬＢＶ全基因组进行扩增，并进行序列分??析。??３．１试验材料??２０１４年６月在安徽六安采集表现明显黄斑花叶症状和皱缩的中华猕猴桃“金艳”??叶片（图３．１）。经液氮速冻后，一部分送北京百迈克生物科技有限公司进行小ＲＮＡ??测序，其它样品于－８０?°Ｃ超低温保存，用于ＣＬＢＶ的全基因组扩增。??


本文编号：3408560