盐霉素高产菌种诱变育种和双组份系统RspA1/A2全局调控机理研究

发布时间：2024-05-24 19:16

　　盐霉素(salinomycin)属于典型的聚醚类抗生素,由白色链霉菌(Streptomyces albus)合成,在农业上主要用于治疗鸡球虫病,在医药上具有抗肿瘤细胞活性,是一种潜在的抗肿瘤药物。本论文主要开展了白色链霉菌诱变育种筛选技术研究和双组份系统RspA1/A2对白色链霉菌基础代谢及盐霉素合成等次级代谢全局调控研究。首先,以工业白色链霉菌(S.albus)S12为出发菌,建立菌种高效诱变筛选平台,通过高通量筛选获得高产菌,同时在转录组数据基础上分析诱变育种提高盐霉素生物合成能力的可能作用机制;其次,研究白色链霉菌(S.albus)双组份系统RspA1/A2对细胞生长相关的初级代谢(如葡萄糖中心代谢途径、氮源代谢和磷源摄入等途径)和盐霉素生物合成等次级代谢的全局调控机理,理解细胞生长和盐霉素合成等次级代谢之间关系。具体结果如下:1.盐霉素工业菌菌种诱变及高产菌株高效合成盐霉素机理研究本研究在已建立的菌种诱变筛选方法基础上,采用琼脂糖扩散法替代原来的24孔板发酵方法来表征盐霉素效价,最后使筛选周期缩短了 18天,筛选效率明显提高。在高产菌株筛选方面,采用常温等离子(atmosphe...

【文章页数】：152 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１．２链霉菌芽孢萌发和菌丝生长１７１??Ｆｉｇ?１．２?Ｓｐｏｒｅ?ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ?ａｎｄ?ｈｙｐｈａｌ?ｇｒｏｗｔｈ?ｏｆ?Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ．??

等。??Ｓｐｏｒｅ?ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ?Ｅｍｅｒｇｅｎｃｅ?ｏｆ?ｇｅｒｍ?ｔｕｂｅ??ＣＡＭＰ??ｃ－ｄｉ－ＡＭＰ?－＞?Ｒｐｆ??ｐｐＧｐｐ??」?Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ－ｌｉｋｅ??ｇｌｙｃａｎ??Ｈｙｐｈａｌ?｜??ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ??????Ｃｓ?丨?Ａ?ＧｌｘＡ?....

图１．３链霉菌细胞后期产孢机制１１８１??

第４页?华东理工大学博士学位论文??８ｌｄＤ：ｃ－ｄｉ－ＧＭＰ?Ｓｐｏｒｅ?ｗａｌｌ?￣??Ｉ?｜??ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ?ｒｅｍｏｄｅｌｌｉｎｇ?Ｐ?Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ?ｂｙ??５ｌｕｉＬＳ??画??ＮＯ—＞ＷｈｉＯ??Ａｅｒｉａｌ?ｆｖｙｐｈａ?ａｂｏｕｔ?ｔ....

图１．４天蓝色链霉菌氮源代谢１２７１??Ｆｉ１．４?Ｎｉｔｒｏｅｎ?ｓｏｕｒｃｅ?ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ?ｉｎ?Ｓ．?ｃｏｅｌｉｃｏｌｏｒ??

变化，微生物进化出复杂的调控网络??去调控跟氮源代谢相关基因的表达水平。例如在肠道杆菌中，双组份系统??ＮｔｒＢ／ＮｔｒＣ参与了氮源代谢调控，当氮源限制时，感应蛋白ＮｔｒＢ磷酸化ＮｔｒＣ，??反应蛋白ＮｔｒＣ被激活并进一步直接调控下游的靶基因的转录水平［２８｜３在枯草芽??孢杆菌....

图１．９盐霉素合成基因簇结构图??Ｆｉｇ?１．９?Ｇｅｎｅ?ｃｌｕｓｔｅｒ?ｏｆ?ｓａｌｉｎｏｍｙｃｉｎ?ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ??

第１４页?华东理工大学博士学位论文??链霉菌合成基因簇才一步一步被发现，２００３年，Ｉｓａｏ?Ｆｕｊｉｉ实验室利用Ｉ型ＰＫＳ??中保守区域序列设计兼并引物，扩增得到一个４．５ｋｂ的片段。进一步经过测序之??后发现其序列属于Ｉ型ＰＫＳ基因簇，通过同源双交换缺失４．５ｋｂ片段中的部分....

本文编号：3981130