α-乳白蛋白源DPP-4抑制肽的制备以及结构解析与功能评价

发布时间：2025-06-18 23:46

　　糖尿病是全球三大流行病之一,其中二型糖尿病(T2DM)占90%以上。近些年来,具有比化学合成类药物更多优势的食品源降糖物质被开发出来并得以应用,如谷类蛋白,鱼肉蛋白及乳蛋白。据文献报道,α乳白蛋白作为DPP-4抑制肽的来源具有较高的潜力。因此,本文以商品化的α-乳白蛋白为原料,利用中心组合-响应面实验(CCD-RSM)水解样品,经过分离纯化,鉴定与合成,得到DPP-4活性肽序列,进行体外抑制活性及功能的化学验证及模型细胞验证。主要结论如下:1、α-葡萄糖苷酶和二肽基肽酶Ⅳ(DPP-4)是Ⅱ型糖尿病的治疗中两种重要的靶向酶。市售的商品化酶来源主要为微生物源,与哺乳动物来源的酶的性质有一定的差异,难以客观的评价这两种酶的抑制剂的筛选。本研究收集新鲜的猪小肠黏膜分泌物及上皮细胞,以现有商业化酶做对照,分析不同部位猪小肠黏膜提取物的α-葡萄糖苷酶和DPP-4酶活及比活力,确定合适的稀释倍数及有效部位,建立了猪小肠源α-葡萄糖苷酶和DPP-4的酶活测定体系,为本研究α-葡萄糖苷酶和DPP-4抑制剂的体外筛选提供可靠的测定方法体系及低廉的酶来源。2、为了更有效的获得来源于α乳白蛋白源的DPP-4抑制...

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【学位级别】：硕士

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摘要
abstract
英文缩略表
第一章 引言
    1.1 糖尿病及其防止机理
        1.1.1 糖尿病概述
        1.1.2 二型糖尿病(T2D)的治疗机理
        1.1.3 二肽基肽酶IV抑制剂作用机理
    1.2 生物活性肽
        1.2.1 生物活性肽种类
        1.2.2 生物活性肽制备方法
        1.2.3 生物活性肽的分离纯化
        1.2.4 食品源生物活性肽
    1.3 研究目的及意义
    1.4 研究内容
第二章 α葡萄糖苷酶和二肽基肽酶IV活性评价体系的确立
    2.1 引言
    2.2 材料和方法
        2.2.1 材料和试剂
        2.2.2 仪器与设备
        2.2.3 试验方法
    2.3 结果与讨论
        2.3.1 猪小肠不同部位的黏膜提取物的α-葡萄糖苷酶酶活
        2.3.2 猪小肠不同部位黏膜提取物的DPP-4 酶活
        2.3.3 抑制率的验证—抑二肽素验证
    2.4 小结
第三章 α乳白蛋白源DPP-4 抑制肽的酶解条件优化
    3.1 引言
    3.2 材料和方法
        3.2.1 材料和试剂
        3.2.2 仪器与设备
        3.2.3 试验设计
        3.2.4 试验方法
    3.3 结果与讨论
        3.3.1 蛋白含量与酶活力
        3.3.2 酶解条件单因素的筛选
        3.3.3 中心组合设计(CCD)获得水解产物
        3.3.4 不同因子及其相互作用对水解产物DPP-4 抑制活性的影响
    3.4 小结
第四章 α-乳白蛋白源DPP-4 抑制肽的分离纯化与鉴定
    4.1 引言
    4.2 材料和方法
        4.2.1 材料和试剂
        4.2.2 仪器与设备
        4.2.3 试验设计
        4.2.4 试验方法
        4.2.5 数据分析
    4.3 结果与讨论
        4.3.1 不同分子量范围的组分的DPP-4 抑制活性
        4.3.2 肽序列的鉴定
        4.3.3 活性肽抑制类型的确定
    4.4 小结
第五章 α-乳白蛋白源DPP-4 抑制肽对H716 细胞内DPP-4及GIP-1 的影响
    5.1 引言
    5.2 材料和方法
        5.2.1 材料和试剂
        5.2.2 仪器与设备
        5.2.3 试验设计
        5.2.4 试验方法
        5.2.5 数据分析
    5.3 结果与讨论
        5.3.1 利格列汀及活性肽的DPP-4 半数抑制浓度
        5.3.2 最适目标肽及阳性药的作用浓度的确定
        5.3.3 细胞毒性实验确定待测样品最适培养浓度
        5.3.4 待测样品对细胞内DPP-4 分泌的影响
        5.3.5 待测样品对细胞内DPP-4 分泌的影响
    5.4 小结
第六章 结论
    6.1 主要结论
    6.2 创新点
    6.3 展望
参考文献
致谢
作者简介



本文编号：4050522