痕量指纹DNA的提取及STR基因分型

发布时间：2017-08-31 03:05

  本文关键词：痕量指纹DNA的提取及STR基因分型

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【摘要】：目的：建立从渗透性和非渗透性载体上提取检验指纹DNA的方法,最大限度地发挥指纹特别是特征点残缺不全的指纹的刑侦作用,为刑侦工作提供科学依据。 方法：利用自主研发的汗潜指纹DNA提取液提取痕量指纹DNA,用改进的MDA扩增法扩增,扩增产物应用AmpF/STR(?) IdentifilerTM CR Amplification Kit, PowerPlex(?) 16 System, GoldeneyeTM DNA身份鉴定系统20A 3种多重STR检测试剂盒进行基因分型检测。 结果：5pg模板改进的MDA扩增产物进行16个STR位点分型检测,可获得12个STR位点基因分型结果,而Sigma WGA法仅获4个位点基因分型结果。改良的MDA法扩增汗潜指纹DNA提取液提取非渗透性载体-玻片上指纹DNA,经AmpFlSTR(?) IdentifilerTM PCR Amplification Kit对16个STR位点分型检测,可获得9个STR位点基因分型结果。而5% chelex-100提取汗潜指纹DNA, STR分型只能获得2-3位点基因分型结果。 结论：改进的MDA方法能提高痕量DNA样本STR分型检验的灵敏度,但指纹DNA的分型检测中存在等位基因偏差现象,实验方法还有待改进。使用SNP标记代替STR标记可能提高痕量DNA正确检出率。
【关键词】：痕量指纹DNA 全基因组扩增 STR
【学位授予单位】：昆明理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：D919.2
【目录】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-12
• 第一章 研究背景12-25
• 1 基因组多态性12-18
• 1.1 RFLP12-13
• 1.2 STR13-17
• 1.3 SNP17-18
• 2. WGA技术18-22
• 2.1 DOP-PCR19
• 2.2 LMP-PCR19
• 2.3 PEP和MDA19-20
• 2.4 pWGA20-22
• 3. 指纹DNA研究现状介绍22-25
• 第二章 商业化WGA kit在指纹DNA的基因分型的应用25-36
• 1. 材料和方法25-31
• 1.1 材料25-27
• 1.1.1 主要试剂25-26
• 1.1.2 主要仪器26-27
• 1.2 方法27-31
• 1.2.1 手指脱落细胞检测27
• 1.2.2 指纹样品的制备27
• 1.2.3 指纹样品的转移27-28
• 1.2.4 汗潜指纹DNA的提取28
• 1.2.5 痕量DNA的WGA扩增28-30
• 1.2.6 产物的纯化30-31
• 2. 结果31-34
• 2.1 手指脱落细胞检测31
• 2.2 不同浓度梯度DNA-9947A标准品WGA扩增结果31-32
• 2.3 纸张和玻片上指纹DNA扩增结果32-34
• 3. 讨论34-36
• 3.1 汗潜指纹DNA检验原理34
• 3.2 渗透性和非渗透性载体指纹DNA提取结果说明34-36
• 第三章 改良MDA扩增方法的建立36-49
• 1. 材料和方法36-43
• 1.1 材料36-37
• 1.1.1 主要试剂36-37
• 1.1.2 主要仪器及软件37
• 1.2 改良MDA方法的建立37-43
• 1.2.1 不同引物及引物组合实验37-40
• 1.2.2 酶浓度的影响40-41
• 1.2.3 起始模板浓度的影响41
• 1.2.4 温度的影响41-42
• 1.2.5 改良MDA法对指纹DNA的扩增42-43
• 2. 结果43-48
• 2.1 不同引物对MDA扩增效率的影响43-44
• 2.2 酶浓度影响的结果44-45
• 2.3 起始模板浓度影响的结果45-46
• 2.4 温度影响的结果46
• 2.5 对指纹DNA扩增的结果46-48
• 3. 讨论48-49
• 第四章 STR基因分型实验49-75
• 1. 材料和方法49-58
• 1.1 材料49-50
• 1.1.1 主要试剂49-50
• 1.1.2 主要仪器及软件50
• 1.2 方法50-58
• 1.2.1 口腔拭子DNA的提取50
• 1.2.2 AmpFlSTR~(?) Identifiler~(TM) PCR Amplification Kit的使用50-51
• 1.2.3 PowerPlex~(?) 16 System试剂盒使用51-52
• 1.2.4 Goldeneye~(TM) DNA身份鉴定系统20A试剂盒的使用52-54
• 1.2.5 样品的电泳54-55
• 1.2.6 数据分析55-58
• 2. 结果58-74
• 2.1 口腔拭子的STR分型结果58-59
• 2.2 10U phi29酶组和20U phi29酶组MDA扩增产物STR分型结果59-60
• 2.3 不同温度下扩增产物的STR分型结果60-64
• 2.4 改良MDA法和Sigma WGA法扩增不同起始浓度9947A STR分型结果64-71
• 2.5 指纹DNA提取扩增的STR分型结果71-74
• 3. 讨论74-75
• 第四章 总结75-76
• 致谢76-77
• 参考文献77-81
• 附录81-87
• 附录A 攻读硕士期间发表论文目录81-82
• 附录B 空白对照STR基因分型图82-83
• 附录C 志愿者口腔拭子STR基因分型图83-87

【参考文献】

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1 顾丽华,平原,阎建军,王德明,陈连康,顾明波,郑秀芬,周怀谷,江涛,李h，

本文编号：763070