生物转化法制备薏苡仁抗高血压活性肽的研究

发布时间：2018-04-21 07:43

  本文选题：薏芯仁 + 酶法　； 参考：《黑龙江中医药大学》2010年硕士论文

【摘要】：本论文采用生物转化方法制备薏苡仁抗高血压肽,初步确定了薏苡仁活性肽的体外抗高血压活性,为抗高血压药的进一步研究提供参考。同时比较了酶法与发酵法制备薏苡仁肽的体外抗高血压活性,结果证明发酵法得到的活性肽具有更强的活性。 本实验分别进行了酶解法和发酵制备薏苡仁肽两方面的研究。优化了薏苡仁蛋白质水提和酶解条件,结果表明,蛋白质水提最佳条件为pH=10,温度70℃,料水比1：15；碱性蛋白酶(Alcalase)对薏苡仁的酶解效果最好,酶解最佳条件为加酶量5%,时间2h,料水比1：25,此时的多肽含量远远高出水解时的含量。用树脂对酶解液进行纯化,大孔吸附树脂DA201-C对酶解液的吸附效果较好；当酶解产物pH为5.5,上样流速1BV/h时,吸附率最高；当用75%乙醇进行解吸时,解吸时间和浓缩时间短,解吸率高。使用高效液相色谱(HPLC)测定树脂纯化后产物的分子量,分子量在278.61至943.32之间的物质占纯化后产物的99.3%。用葡聚糖凝胶Sephadex G-15对纯化产物进行分离,以去离子水为缓冲液时可以得到三个峰,其中B峰具有最高的ACE抑制率,为80.1%。 优化了薏苡仁蛋白质发酵条件,结果表明,三种曲霉分别发酵中药薏苡仁,活性肽含量黑曲霉达到6.14mg/ml;米曲霉达到2.58mg/ml;红曲霉分别为2.93mg/ml,因此确定黑曲为最佳菌种进行混合发酵。最佳条件为发酵时间90h,薏苡仁料液浓度9%,PH=5,接种量11%。混合发酵对黄酒酵母、酒精酵母、啤酒酵母进行筛选,确定黄酒酵母为最佳菌种。用树脂对酶解液进行纯化。使用HPLC测定树脂纯化后产物的分子量在267.91至930.35之间的物质占纯化后产物的98.4%。用葡聚糖凝胶Sephadex G-15对纯化产物进行分离,以去离子水为缓冲液时可以得到五个峰,其中B峰具有最高的ACE抑制率,为83.2%,体外抗高血压活性与酶解薏苡仁活性肽相比有所提高,因此发酵法比酶解效果更好。
[Abstract]:In this paper, the antihypertensive peptide of Coix seed was prepared by biotransformation, and the in vitro antihypertensive activity of Coix seed active peptide was preliminarily determined, which provides a reference for the further study of antihypertensive drugs. At the same time, the antihypertensive activity of Coix seed peptide prepared by enzymatic method and fermentation method was compared in vitro. The results showed that the active peptide obtained by fermentation method had stronger activity. The enzymatic hydrolysis and fermentation of Coix seed peptide were studied in this experiment. The optimum conditions for protein extraction and enzymatic hydrolysis of Coix seed were optimized. The results showed that the optimum conditions of protein extraction were pH 10, temperature 70 鈩，

本文编号：1781520