薤白化学成分的研究

发布时间：2021-04-01 15:13

薤白(Allii macrostemonis bulbus)为百合科植物小根蒜(Allium macrostemon Bge.)或薤(Allium chinense G.Don)的干燥鳞茎,具有抗肿瘤、抗氧化、降脂、解痉、抑菌、抑制动脉粥样硬化等药理作用,可用于治疗冠心病、心绞痛、支气管哮喘、高血脂以及心肌缺血等疾病。本文从薤白的75%乙醇提取物中分离得到18个单体化合物(分别标记为XB-1~XB-18),利用核磁、质谱等波谱学手段,结合其理化性质,鉴定出其中15个化合物的化学结构,其中2个为新化合物,1个为首次从薤白中分离得到的化合物。新化合物分别为(25S)-26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-5α-呋甾-2α,3β,22,26-四醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(化合物XB-15)和26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-5α-呋甾-25(27)-烯-3β,22,26-三醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(化合物XB-16)。首次分得的化合物为26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-5α-呋甾-25(27)-烯-2α,3β,22,26-四醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(化合物XB-12)。在化学成分研究的基础上,本文建立了薤白中螺甾型皂苷薤白甙甲(化合物XB-1)和(25R)-5β-螺甾-3β-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-β-D-吡喃半乳糖苷(化合物XB-4)含量的SPE-HPLC-ELSD测定方法。首先,通过提取溶剂种类、提取方法、提取溶剂用量和提取次数的考察,确立了最佳提取方法;其次,进行了方法学考察。实验结果表明,化合物XB-1和XB-4分别在0.40~20.00μg和0.20~10.00μg范围内峰面积y(lgS均)和进样浓度x(lgm)线性关系良好,化合物XB-1和XB-4的精密度、重复性、稳定性的RSD值均小于2.0%,加样回收率的RSD值分别为1.59%和1.87%,说明所建立的含量测定方法具有精密度好、准确度高等优点。含量测定结果表明,化合物XB-1和XB-4的平均含量分别为0.21 mg·g-1和0.07 mg·g-1。本文通过CCK-8抗肿瘤细胞活性实验,对分得的新化合物(XB-15,25S-构型)及其异构体(XB-14,25R-构型)对肝癌HepG2细胞、黑色素瘤A375细胞、乳腺癌MCF-7细胞和肺癌A549细胞的增殖抑制活性进行了研究。结果表明,互为R/S异构的化合物XB-14和XB-15对于肺癌A549细胞、黑色素瘤A375细胞和乳腺癌MCF-7细胞抑制作用均较弱,对于肝癌HepG2细胞均具有一定的抑制作用,且R构型的化合物XB-14的抑制作用大于XB-15。说明相同的化合物对不同的肿瘤细胞具有不同的增殖抑制作用,同时仅仅R/S结构上的不同也会产生增殖抑制作用上的差异。综上,本论文从薤白乙醇提取物中共计分离并鉴定了15个化合物,其中2个为新化合物,1个为首次分得的化合物;建立了薤白药材中两种螺甾型皂苷的含量测定方法;研究了互为R/S异构的化合物XB-14和XB-15对肿瘤细胞的增殖抑制作用。本论文的研究结果为薤白药效物质基础的深入研究、薤白质量标准的完善以及薤白中甾体皂苷类化合物在抗肿瘤方面的应用提供了新的科学依据。
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：O657;R284.1

文章目录

摘要

Abstract

第一章绪论

1.1 植物学特征

1.1.1 小根蒜

1.1.2 薤

1.2 化学成分

1.2.1 甾体皂苷类化合物

1.2.2 含硫化合物

1.2.3 含氮化合物

1.2.4 脂肪酸类化合物

1.2.5 多糖类化合物

1.2.6 其他成分

1.3 含量测定

1.4 药理活性

1.4.1 抗肿瘤作用

1.4.2 抑制血小板凝聚作用

1.4.3 降脂和抑制动脉粥样硬化

1.4.4 保护心肌细胞作用

1.4.5 抗氧化作用

1.4.6 抑菌作用

1.4.7 解痉平喘作用

1.4.8 其他作用

1.5 临床应用

1.5.1 治疗冠心病和心绞痛

1.5.2 治疗支气管哮喘

1.5.3 治疗高血脂

1.5.4 治疗心肌缺血

1.6 研究目的与研究内容

第二章薤白的化学成分研究

2.1 实验部分

2.1.1 实验仪器与试剂

2.1.2 薤白化学成分的提取与分离

2.1.2.1 药材来源与鉴定

2.1.2.2 药材提取与分离

2.1.2.3 酸水解与HPLC-MS检验

2.2 薤白的化学成分结构鉴定

2.2.1 新化合物的结构解析

2.2.1.1 化合物XB-15 的结构解析

2.2.1.2 化合物XB-16 的结构解析

2.2.2 已知化合物的结构解析

2.2.2.1 化合物XB-12 的结构解析

2.2.2.2 化合物XB-1 的结构解析

2.2.2.3 化合物XB-2 的结构解析

2.2.2.4 化合物XB-3 的结构解析

2.2.2.5 化合物XB-4 的结构解析

2.2.2.6 化合物XB-5 的结构解析

2.2.2.7 化合物XB-6 的结构解析

2.2.2.8 化合物XB-7 的结构解析

2.2.2.9 化合物XB-9 的结构解析

2.2.2.10 化合物XB-10 的结构解析

2.2.2.11 化合物XB-11 的结构解析

2.2.2.12 化合物XB-14 的结构解析

2.2.2.13 化合物XB-17 的结构解析

2.2.3 未确定化合物的结构解析

2.2.3.1 化合物XB-8 的结构分析

2.2.3.2 化合物XB-13 的结构分析

2.2.3.3 化合物XB-18 的结构分析

第三章 SPE-HPLC-ELSD法测定薤白中螺甾皂苷的含量

3.1 实验仪器、试剂及对照品

3.2 色谱条件

3.2.1 ELSD条件选择

3.2.2 流动相选择

3.3 提取条件的考察

3.3.1 提取溶剂考察

3.3.2 提取方法考察

3.3.3 液料比考察

3.3.4 提取次数考察

3.3.5 提取条件的确立

3.4 SPE条件考察

3.4.1 SPE小柱预处理

3.4.2 样品前处理

3.4.3 上样

3.4.4 淋洗剂条件考察

3.4.5 洗脱剂条件考察

3.4.6 供试品溶液的制备

3.4.7 对照品储备液的制备

3.5 方法学考察

3.5.1 线性关系的考察

3.5.2 精密度实验

3.5.3 重复性实验

3.5.4 稳定性实验

3.5.5 加样回收率实验

3.6 含量测定

3.6.1 供试品溶液的制备

3.6.2 对照品溶液的制备

3.6.3 样品的测定

第四章薤白皂苷单体的抗肿瘤活性研究

4.1 实验材料

4.1.1 细胞株

4.1.2 实验仪器、试剂及样品

4.2 实验方法

4.2.1 样品溶液配制

4.2.1.1 pH 7.4 的PBS磷酸盐缓冲溶液配制

4.2.1.2 化合物XB-14 母液的配制

4.2.1.3 化合物XB-15 母液的配制

4.2.2 细胞培养

4.2.3 CCK-8 法抗肿瘤活性实验

4.2.4 数据处理

4.3 实验结果与讨论

4.3.1 化合物XB-14 的抗肿瘤活性

4.3.2 化合物XB-15 的抗肿瘤活性

4.3.3 小结

第五章总结

参考文献

附图

作者简介

致谢

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