NQO1抑制剂Dicoumarol调控HBx稳定性对乙肝病毒转录复制的重要作用

发布时间:2021-08-11 06:36
  目的1.明确NQO1抑制剂DIC对HBV转录复制的调控作用。2.解析NQO1调控HBx蛋白稳定性的分子机制。3.阐明NQO1稳定HBx蛋白对ccc DNA转录和HBV复制过程的重要作用。4.探究NQO1/HBx调控ccc DNA转录的分子机制。5.体内实验充分评估NQO1抑制剂DIC的抗HBV效能。方法1.利用Nano-Glo?Hi Bi T Lytic Detection System评估NQO1抑制剂DIC对病毒蛋白HBx表达水平的调控作用;Western blot检测DIC对外源性和内源性HBx蛋白水平的影响。2.在HBV感染的Hep G2-NTCP中,使用不同浓度的DIC处理细胞:real-time PCR(RT-PCR)检测total HBV RNAs和pg RNA的水平;Northern blot检测HBV 3.5-kb和2.1/2.4-kb RNA水平;Quantitative real-time PCR(q RT-PCR)检测HBV ccc DNA水平。3.在Hep G2细胞中敲减/敲除或过表达NQO1,共转染HBx:Western blot和RT-PCR检测HBx蛋白... 

【文章来源】:重庆医科大学重庆市

【文章页数】:139 页

【学位级别】:博士

【部分图文】:

NQO1抑制剂Dicoumarol调控HBx稳定性对乙肝病毒转录复制的重要作用


HiBiT裂解检测系统检测DIC对HiBiT-HBx表达的影响

NQO1抑制剂Dicoumarol调控HBx稳定性对乙肝病毒转录复制的重要作用


Westernblot检测DIC对外源性HBx表达的影响

细胞,医科大,蛋白,学位论文


重庆医科大学博士研究生学位论文41于96孔板后,使用不同浓度的Dicoumarol(DIC)处理细胞72h,MTT实验检测DIC对细胞活性的影响。结果显示,与对照组比较,DIC的CC50均大于400μM;且在HepG2-NTCP、HepAD38和HepG2等3种细胞中CC50大于800μM,以上结果说明DIC的细胞毒性较小(图1.2)。图1.2MTT实验检测DIC对细胞活性的影响Figure1.2EffectsofDIConcellviabilityweredeterminedbyMTTassay.2.2Dicoumarol对HBx表达的影响2.2.1Dicoumarol对外源性HBx表达的影响为了进一步探究DIC对HBx表达的影响,我们接下来在HepG2细胞中分别转染了3×Flag-HBx和2×HA-HBx后,采用不同浓度的DIC处理,westernblot检测HBx蛋白水平发现,DIC可显著抑制外源性HBx蛋白的表达(图1.3)。图1.3Westernblot检测DIC对外源性HBx表达的影响Figure1.3TheeffectofDIContheexpressionlevelofexogenousHBxwasdeterminedbyusingwesternblot.

【参考文献】:
期刊论文
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本文编号:3335659

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