犬干扰素α/RTB重组融合蛋白制备及抗病毒活性研究

发布时间：2024-05-09 00:33

　　干扰素(Interferon,IFN)是机体抗病毒感染的第一道免疫屏障,应用领域已逐步发展到抗病毒、抗肿瘤等方面。犬干扰素α(Canine Interferon alpha,CaIFNα)是犬类动物在受到外界特定刺激后,免疫细胞分泌的细胞因子之一,具有广谱抗病毒、加强免疫应答反应、弱抗原性等一系列特点。CaIFNα的抗病毒作用主要与干扰素刺激基因产物(Interferon Stimuluated Genes,ISGs)有关,ISGs通过抑制病毒核酸的转录翻译及蛋白合成从而发挥抗病毒作用。但是由于CaIFNα半衰期短等原因限制了 CaIFNα在临床中的应用。蓖麻毒素(Ricin toxin,RT)为一种高毒性的植物蛋白,主要存在于蓖麻籽中,由A链和B链组成,两条链通过二硫键连接,其中RTA是毒性链,RTB是运载体,具有凝集素作用,与哺乳细胞膜表面甘露糖受体结合,运输RTA亚基进入细胞内部发挥毒性。课题组前期研究发现重组RTB可作为免疫增强剂,增强机体细胞免疫应答及体液免疫应答。并且可巨噬细胞增加JAK1、TYK2、STAT1等细胞因子磷酸化水平。本研究采用基因重组表达技术,将CaIFNα...

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【部分图文】：

图１．４重组质粒ｐＭＤ１８Ｔ－ＣａＩＦＮａ／ＲＴＢ限制性内切酶酶切鉴定??

军事科学院博士学位论文??１．３．１．２重组ｐＭＤ１８Ｔ－ＣａＩＦＮａ／ＲＴＢ克隆质粒鉴定??ＣａＩＦＮａ／ＲＴＢ?＾的基因重叠ＰＣＲ产物经胶回收后与ｐＭＤ１８Ｔ载体进行连接，??转化后的ＴｏｐｌＯ大肠杆菌感受态细胞进行蓝白斑筛选并扩大培养，对提取的质粒??进行ＰＣＲ和Ｍ／ｅ?Ｉ....

图１．３重组质粒ｐＭＤ１８Ｔ－ＣａＩＦＮａ／ＲＴＢ的ＰＣＲ鉴定结果??

军事科学院博士学位论文??１．３．１．２重组ｐＭＤ１８Ｔ－ＣａＩＦＮａ／ＲＴＢ克隆质粒鉴定??ＣａＩＦＮａ／ＲＴＢ?＾的基因重叠ＰＣＲ产物经胶回收后与ｐＭＤ１８Ｔ载体进行连接，??转化后的ＴｏｐｌＯ大肠杆菌感受态细胞进行蓝白斑筛选并扩大培养，对提取的质粒??进行ＰＣＲ和Ｍ／ｅ?Ｉ....

图１．５?ｐＥＴ２８ａ－ＣａＩＦＮａ／ＲＴＢ重组表达质粒限制性内切酶酶切鉴定??

，将所获得的ＣａＩＦＮａ／ＲＴＢ目的片段连接至大肠杆菌??表达载体ｐＥＴ２８ａ中，连接产物转化至ＴｏｐｌＯ感受态细胞，经Ｋａｎ＋抗性扩大培养??并提取重组表达质粒。重组表达质粒进行限制性内切酶酶切鉴定鉴定。酶切产物??经１％琼脂糖凝胶电泳分析，与预期结果相符。限制性内切酶酶切鉴定....

图１．６?ＣａＩＦＮａ／ＲＴＢ核酸序列示意图??

?军事科学院博士孛、位论文???Ｇｅｎｅ?Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ??Ｆｅａｔｕｒｅ?Ｋｅｙ?Ｐｏｓｉｔｉｏｎ?Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ?Ｇｒａｐｈｉｃａｌ?Ｖｉｅｗ?Ｌｅｎｇｔｈ??Ｇｅｎｅ?Ｉ?１－４３５?Ｃａｎｉｎｅ?Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ?ａ?４３５??Ｇｅｎｅ?ＩＩ?４３６－５....

本文编号：3968054