乙型肝炎病毒通过miR-192-3p-XIAP轴调控NF-κB信号通路诱导自噬以促进病毒自身复制

发布时间：2023-01-03 09:29

　　乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus,HBV）慢性感染是肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）发生和发展的主要诱导因素之一。虽然乙肝疫苗的普及大大减少了新感染的数量,而核苷类似物和干扰素等抗病毒药物的治疗也极大地降低了感染患者的死亡率。但由于现有的药物不能完全清除HBV感染过程中产生的共价闭合环状DNA（covalently closed circular DNA,cccDNA）,导致目前全世界仍有超过3.5亿慢性乙肝病毒感染者,每年约88.7万人死于HBV引起的肝硬化、肝癌及其并发症。故为探索乙型肝炎和肝癌的新的治疗靶点和开发新的治疗药物提供理论依据,需要进一步研究HBV的持续性复制和致病机制。越来越多的证据表明微小RNA（microRNAs,miRNAs）参与HBV复制和HBV相关肝癌的发生。miRNA是一类短的、内源性的非编码RNA,可通过与靶基因mRNA的3’-非翻译区（3’-Untranslated regions,3’-UTR）上的种子序列互补配对结合,调控靶基因的转录后水平。有研究表明,HBV可上调或下调胞内多种miRNAs的表达... 

【文章页数】：151 页

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摘要
ABSTRACT
第一章 研究背景
    1.1 乙型肝炎病毒(HBV)研究现状概述
        1.1.1 HBV的发现
        1.1.2 HBV的基因组结构和编码的蛋白
        1.1.3 HBV的感染周期
        1.1.4 HBx的功能研究
    1.2 HBV利用自噬反应促进自身复制
        1.2.1 自噬的发现
        1.2.2 自噬的分类
        1.2.3 自噬反应发生的过程
        1.2.4 HBV利用自噬促进自身复制
    1.3 miRNA在 HBV诱导自噬反应中的研究进展
        1.3.1 miRNA的发现
        1.3.2 miRNA的产生和功能
        1.3.3 miRNA与自噬
        1.3.4 miRNA与 HBV
        1.3.5 miRNA在 HBV诱导自噬反应中的调控作用
    1.4 NF-κB信号通路的研究进展
        1.4.1 NF-κB信号通路的组成
        1.4.2 NF-κB信号通路的类别
        1.4.3 HBV/HBx调控NF-κB信号通路的活性
        1.4.4 NF-κB信号通路与自噬
    1.5 XIAP的研究进展
    1.6 本章小结
第二章 材料与方法
    2.1 实验相关仪器设备
    2.2 实验材料与试剂
        2.2.1 细胞,细胞培养与细胞转染
        2.2.2 表达质粒的构建
        2.2.3 化学药品,抗体和其他试剂
        2.2.4 细胞/组织/血清中的RNA提取
        2.2.5 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)试剂
        2.2.6 免疫印迹(western blot)所用试剂
        2.2.7 双荧光素酶报告基因实验所用材料
        2.2.8 共聚焦和透射电镜观察自噬体所用材料
        2.2.9 酶联免疫吸附(ELISA)检测试剂盒
        2.2.10 Southern blot and Northern blot所用试剂
        2.2.11 免疫共沉淀实验(Co-IP)
        2.2.12 染色质免疫共沉淀(ChIP)实验所用试剂
        2.2.13 小鼠尾静脉高压注射相关材料
        2.2.14 本研究所用引物列表
    2.3 实验步骤
        2.3.1 细胞相关实验
        2.3.2 质粒的构建与扩增
        2.3.3 RNA的提取
        2.3.4 qRT-PCR实验
        2.3.5 免疫印迹(western blot)
        2.3.6 双荧光素酶报告基因实验
        2.3.7 激光共聚焦显微镜观察自噬体
        2.3.8 ELISA检测HBV抗原分泌
        2.3.9 Southern blot 和 Northern blot 实验
        2.3.10 Co-IP 实验
        2.3.11 CHIP 实验
        2.3.12 Balb/C小鼠尾静脉高压注射
        2.3.13 HBV病毒的浓缩与定量
        2.3.14 HBV病毒感染人原代肝细胞
第三章 实验结果
    3.1 HBV感染抑制miR-192-3p的表达
        3.1.1 研究背景
        3.1.2 HBV浓度梯度抑制miR-192-3p的分泌
        3.1.3 HBV浓度梯度抑制miR-192-3p的胞内表达
        3.1.4 HBV通过HBx抑制miR-192-3p转录
        3.1.5 c-Myc显著抑制miR-192-3p的水平
        3.1.6 HBx通过稳定c-Myc表达而抑制miR-192-3p的水平
        3.1.7 HBx与c-Myc共同结合miR-192 的启动子
    3.2 HBV抑制miR-192-3p而上调XIAP的表达
        3.2.1 研究背景
        3.2.2 筛选miR-192-3p的靶基因
        3.2.3 确证XIAP作为miR-192-3p的靶基因
        3.2.4 HBV抑制miR-192-3p而上调XIAP的表达
    3.3 HBV通过miR-192-3p-XIAP轴诱导自噬
        3.3.1 研究背景
        3.3.2 HBV诱导自噬发生
        3.3.3 miR-192-3p抑制自噬反应但不影响自噬流
        3.3.4 miR-192-3p抑制HBV诱导的自噬反应
        3.3.5 XIAP诱导自噬
        3.3.6 Anti-miR-192-3p通过上调XIAP而促进自噬
        3.3.7 HBV调控miR-192-3p-XIAP轴诱导自噬
    3.4 HBV通过miR-192-3p-XIAP诱导自噬而促进HBV复制
        3.4.1 研究背景
        3.4.2 miR-192-3p抑制HBV壳体化DNA的水平和抗原分泌
        3.4.3 XIAP促进HBV复制
        3.4.4 Anti-miR-192-3p通过上调XIAP而促进病毒复制
        3.4.5 HBV调控miR-192-3p-XIAP轴诱导HBV自身复制
    3.5 HBV通过miR-192-3p-XIAP轴调控NF-ΚB通路诱导自噬而促进HBV复制
        3.5.1 研究背景
        3.5.2 miR-192-3p靶向XIAP抑制NF-κB信号通路
        3.5.3 HBV通过miR-192-3p上调XIAP激活NF-κB信号通路
        3.5.4 SC-514 抑制NF-κB信号通路减弱了HBV诱导的自噬和HBV病毒复制
        3.5.5 SN50 抑制NF-κB信号通路减弱了HBV诱导的自噬和HBV病毒复制
    3.6 体内实验证实HBV通过miR-192- 3p-XIAP轴诱导自噬并且促进其自身的复制
        3.6.1 研究背景
        3.6.2 在小鼠体内HBV急性感染抑制miR-192-3p的表达
        3.6.3 在小鼠体内HBV-miR-192-3p-XIAP轴诱导自噬
        3.6.4 在小鼠体内HBV通过miR-192-3p-XIAP轴促进自身复制
    3.7 HBV病毒感染人的原代肝细胞后抑制miR-192-3p而上调XIAP水平进而诱导自噬并且促进其自身的复制
        3.7.1 研究背景
        3.7.2 HBV感染原代肝细胞抑制miR-192-3p的表达
        3.7.3 HBV感染原代肝细胞促进XIAP的转录
        3.7.4 miR-192-3p抑制HBV感染原代肝细胞诱导的自噬
第四章 总结与讨论
参考文献
攻博期间发表的科研成果
致谢



本文编号：3727202