氯化两面针碱通过抑制TOP1促进IL-10表达治疗内毒素血症的研究

发布时间：2023-01-26 03:00

　　1、研究背景和目的内毒素血症是一种由内毒素（主要成分为脂多糖,LPS）进入血液引起的急性病症。LPS在血液中会激活巨噬细胞、树突状细胞等,使其大量释放促炎细胞因子,导致补体系统和凝血系统异常活化,引起多器官的微血管循环障碍、弥漫性血管内凝血、休克甚至死亡。白介素-10（interleukin-10,IL-10）是一种重要的免疫调节因子,在内毒素血症中能抑制巨噬细胞等的活化和促炎细胞因子的产生,抑制过激的免疫反应,减少炎症损伤。IL-10可以在内毒素血症的临床试验中降低促炎细胞因子水平,在内毒素血症小鼠中也能抑制炎症反应,提高生存率。中药两面针是芸香科植物两面针（Zanthoxylum nitidum）的干燥根,用于跌打损伤、牙龈炎、风湿病等的治疗。氯化两面针碱（nitidine chloride,NC）是两面针的主要活性成分。课题组前期研究发现NC能促进LPS刺激下树突状细胞中IL-10的表达。本研究旨在确定NC调控IL-10的作用特征,考察其作用靶点和作用机制,并在小鼠内毒素血症模型中考察其体内抗炎活性。2、研究方法（1）NC调控IL-10表达的作用特征研究本研究使用了RAW264.... 

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【学位级别】：博士

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摘要
abstract
缩略词表
第一章 NC促进LPS刺激下IL-10 的表达
    一、引言
        (一)IL-10 的免疫调节功能
        (二)两面针及氯化两面针碱
        (三)氯化两面针碱与炎症
    二、实验材料
        (一)实验细胞株
        (二)实验试剂
        (三)仪器与设备
    三、实验方法
        (一)实验动物饲养及伦理
        (二)原代细胞的制备及培养
        (三)传代细胞系的培养
        (四)细胞毒性的测定
        (五)ELISA测定IL-10 蛋白浓度
        (六)qPCR测定IL-10 mRNA水平
        (七)数据处理和统计学分析
    四、实验结果
        (一)NC的细胞毒性考察
        (二)NC调控IL-10 表达的时间特征
        (三)NC浓度依赖地促进IL-10表达
    五、小结与讨论
第二章 NC通过抑制TOP1 促进IL-10 表达
    一、引言
        (一)拓扑异构酶I
        (二)TOP1 抑制剂
        (三)TOP1 抑制剂与炎症
    二、实验材料
        (一)实验细胞株
        (二)实验试剂
        (三)仪器与设备
    三、实验方法
        (一)拓扑异构酶I酶活性的测定
        (二)细胞因子表达测定
        (三)TOP1 干扰shRNA载体的构建
        (四)干扰慢病毒的制备
        (五)慢病毒转染THP-1 细胞
        (六)Western Blots
        (七)数据处理和统计学分析
    四、实验结果
        (一)NC可抑制TOP1 酶活性
        (二)TOP1 抑制剂增强LPS刺激下IL-10 的表达
        (三)TOP1 干扰慢病毒的构建及干扰效果考察
        (四)TOP1敲减对TOP1 抑制剂调控IL-10 的影响
    五、小结与讨论
第三章 NC和 TOP1 抑制剂治疗小鼠内毒素血症
    一、引言
        (一)内毒素血症及其动物模型
        (二)内毒素血症与细胞因子
    二、实验材料
        (一)实验细胞株
        (二)实验试剂
        (三)仪器与设备
    三、实验方法
        (一)动物实验处理及伦理
        (二)内毒素血症模型建立
        (三)小鼠血清及组织提取和细胞因子测定
        (四)组织H-E染色
        (五)IL-10 敲除小鼠和Anti-IL-10 抗体封闭
        (六)数据处理和统计学分析
    四、实验结果
        (一)NC和 TOP1 抑制剂提高内毒素血症小鼠的生存率
        (二)NC和 TOP1 抑制剂影响小鼠体内细胞因子产生
        (三)IL-10 介导了NC和 TOP1 抑制剂的抗炎作用
        (四)IL-10 影响了NC和 TOP1 抑制剂对促炎细胞因子的调控
    五、小结与讨论
第四章 NC和 TOP1 抑制剂通过增强PI3K-AKT通路活化促进IL-10 表达
    一、引言
        (一)IL-10 表达的调控
    二、实验材料
        (一)实验细胞株
        (二)实验试剂
        (三)仪器与设备
    三、实验方法
        (一)细胞培养
        (二)mRNA降解测定和半衰期计算
        (三)细胞因子含量测定
        (四)Western Blots
        (五)单细胞凝胶电泳
        (六)小鼠模型中PI3K-Akt通路考察
    四、实验结果
        (一)NC和 TOP1 抑制剂增强转录促进IL-10 表达
        (二)PI3K-Akt通路在NC调控IL-10 表达中发挥重要作用
        (三)NC和 TOP1 抑制剂增强LPS刺激下PI3K-Akt通路的活化
        (四)PI3K-Akt通路介导了NC和 TOP1 抑制剂对IL-10 的上调
        (五)NC通过活化PI3K-Akt通路缓解小鼠内毒素血症
        (六)NC和 TOP1 抑制剂通过PI3K-Akt通路抑制促炎细胞因子
    五、讨论
第五章 NC和 TOP1 抑制剂通过激活DNA损伤应答促进IL-10表达
    一、引言
        (一)TOP1 抑制剂调控机制
        (二)DNA损伤应答
    二、实验材料
        (一)实验细胞株
        (二)实验试剂
        (三)仪器与设备
    三、实验方法
        (一)细胞培养
        (二)细胞因子含量测定
        (三)Western Blots
        (四)单细胞凝胶电泳
    四、实验结果
        (一)NC和 TOP1 抑制剂调控IL-10 的可逆性考察
        (二)NC在无毒剂量下引起DNA损伤
        (三)NC和 TOP1 抑制剂激活DNA损伤应答
        (四)阻断DNA损伤应答会影响NC和 TOP1 抑制剂的药效
    五、讨论
总结与讨论
参考文献
附录
文献综述
    参考文献


【参考文献】：
期刊论文
[1]Topoisomerase I in Human Disease Pathogenesis and Treatments[J]. Min Li,Yilun Liu.  Genomics,Proteomics ＆ Bioinformatics. 2016(03)
[2]氯化两面针碱的研究近况[J]. 刘丽敏,刘华钢.  时珍国医国药. 2007(01)

博士论文
[1]天然产物白首乌二苯酮的神经保护作用和两面针碱的免疫调控作用机制研究[D]. 岳荣彩.第二军医大学 2013



本文编号：3732095