竹叶花椒肉桂酰辅酶A还原酶基因克隆与表达分析

发布时间：2025-05-07 05:30

　　 肉桂酰辅酶A还原酶(cinnamoyl-CoA reductase, CCR)在木质素生物合成途径中起着关键作用。本研究依据转录组数据设计特异性引物,采用RT-PCR方法从竹叶花椒(Zanthoxylum armatum)中克隆得到一个全新的CCR基因的全长c DNA序列,命名为ZaCCR。序列分析结果表明,ZaCCR包含完整的cDNA开放阅读框(OFR),由990 bp组成,编码329个氨基酸。Blast比对结果显示该蛋白质属于CCR家族蛋白;系统进化树结果显示竹叶花椒(Zanthoxylum armatum)与芸香科植物甜橙(Sweet orange, Citrus sinensis)、蜜柑(Satsuma mandarin, Citrus unshiu)等亲缘关系较近。荧光定量PCR检测显示,ZaCCR在竹叶花椒中的表达量从大到小分别为:嫁接树的茎、实生树的茎、嫁接树的叶、实生树的叶。

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图2 竹叶花椒Za CCR蛋白与其他植物CCR蛋白的系统进化树

研究显示CCR在木质素的生物合成途径中起着不可或缺的作用，认为其可能调控木质素生物合成途径中碳的流向(李波等,2006)。本研究从转录组角度设计CCR基因的特异性引物，通过基因测序成功验证了所克隆基因为竹叶花椒CCR基因，该基因全长990bp，编码329个氨基酸。蛋白序列分析发....

图1 CCR蛋白序列比对

将推导出来的ZaCCR蛋白序列在美国国家生物技术信息中心(NCBI)进行比对，得到其他植物CCR蛋白序列，用MEGA7中自带的ClusterW进行蛋白序列多重比对后，用Neighbor-joining算法(自检举1000次)绘制出竹叶花椒ZaCCR蛋白与其他植物的CCR....

图3 Za CCR分别在嫁接树和实生树的茎和叶中的表达情况

通过对竹叶花椒ZaCCR蛋白进行系统进化分析，发现该蛋白与芸香科的甜橙(Citrussinensis)、蜜柑(Citrusunshiu)、克里曼丁桔(Citrusclementina)CCR蛋白同源性较高，再次验证了本试验所克隆基因为CCR基因。花椒是中国栽培历史悠久的....

本文编号：4043674