半乳糖凝集素-1对LTA诱导巨噬细胞NLRP3炎症小体的抑制及机制探讨

发布时间：2023-06-28 01:17

　　目的研究半乳糖凝集素-1(Gal-1)对金黄色葡萄球菌脂磷壁酸(LTA)诱导Raw264.7细胞NLRP3炎症小体活化的影响及初步机制。方法采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色(MTT)法检测不同浓度重组小鼠源半乳糖凝集素-1(rmGal-1)对细胞活力的影响;建立LTA诱导的小鼠巨噬细胞系Raw264.7炎症模型,分别用rmGal-1和NF-κB抑制剂JSH-23预处理Raw264.7细胞。激光共聚焦显微镜观察细胞内P-p65及NLRP3的表达;Western blot法进一步检测细胞中p65、P-p65、NLRP3、ASC、Caspase-1和Pro-Caspase-1的蛋白表达水平。结果 rmGal-1浓度0.04μg/ml～0.4μg/ml时对Raw264.7细胞活力无明显影响;在LTA刺激的Raw264.7巨噬细胞中,内源性Gal-1和NLRP3的蛋白表达水平呈时间性依赖增加,并在3 h到达高峰;rmGal-1预处理后显著抑制P-p65、NLRP3、ASC及Caspase-1表达。同样地,作为阳性对照,JSH-23预处理后,P-p65、NLRP3、ASC及Caspase-1的表达...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 细胞系
        1.1.2 主要试剂及仪器
    1.2 方法
        1.2.1 细胞培养Raw264.7
        1.2.2 四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色[3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT]法检测rm Gal-1作用下Raw 264.7细胞活力
        1.2.3 建立LTA刺激巨噬细胞的炎症反应模型
        1.2.4 rmGal-1干预LTA刺激下的巨噬细胞
        1.2.5 JSH-23干预LTA刺激下的巨噬细胞
        1.2.6 激光共聚焦观察P-p65及NLRP3炎症小体的表达水平
        1.2.7 蛋白提取和Western blot法检测相关蛋白表达
    1.3 统计学处理
2 结果
    2.1 rmGal-1对Raw264.7 细胞活力的影响
    2.2 LTA诱导Raw246.7巨噬细胞中NF-κB-NLRP3通路活化并促进内源性Gal-1高表达
    2.3 rmGal-1和JSH-23预处理后对Raw264.7 巨噬细胞中NF-κB及NLRP3炎症小体表达的影响
3 讨论



本文编号：3835691