风疹病毒结构蛋白多免疫显性区域诊断抗原的制备及其诊断效能评价

发布时间：2025-01-04 04:19

　　 对串联风疹病毒(Rubella virus,RV) 3个结构蛋白6个免疫显性区域进行制备(命名为B103),并将其应用于血清学诊断中。选取RV C aa 1–30&aa 96–123、E2 aa 31–105和E1 aa 11–39&aa 154–277&aa 389–412等6个免疫显性区域,将其串联并基因合成;将此基因片段插入TRX和His标签之间构建表达质粒;蛋白B103在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,并利用Streamline Chelating亲和层析和DEAE阴离子交换层析纯化目的蛋白,Sephadex G-25分子筛分析其折叠情况及均一性;利用免疫印迹技术对蛋白B103的抗原性进行鉴定,并建立RV-IgM抗体捕获法ELISA检测技术,初步评价此方法对阴阳血清样本的鉴别能力。蛋白B103以可溶性形式表达,其表达量约占菌体总蛋白的18.57%,经纯化后蛋白B103浓度为3.026 mg/mL,纯度为95.35%;免疫印迹实验表明蛋白B103能与RV急性期血清发生反应;对40份RV急性期血清及40份RV阴性血清进行检测发现可以很好地鉴别阴阳性血清...

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【部分图文】：

图1B103表达质粒示意图Fig.1SchematicdiagramofB103expressionplasmids.

端为His标签，连接臂为GGGSGGGS，以及合适的酶切位点(如NdeⅠ、NcoⅠ和XhoⅠ等)。B103F基因片段大小约800bp，构建好的表达质粒经测序、双酶切鉴定及小量表达证实构建成功，命名为B103质粒。小量表达SDS-PAGE结果发现，目的蛋白分子量与预期相同，约为44....

图3蛋白B103凝胶过滤分析Fig.3GelfiltrationanalysisofB103protein.

主要分布于200mmol/LNaCl洗脱液中，纯度为95.35%，浓度为3.026mg/mL(图2B)。经过凝胶过滤层析发现(图3)，纯化后的蛋白B103存在于单一洗脱峰中，峰尖而且分布优异表明其成分均一性优异，折叠成熟，可以作为检测抗原应用于ELISA检测中。2.2蛋白B103....

图5蛋白B103在RV感染血清学诊断效果评价Fig.5TheevaluationofthediagnosticeffectofproteinB103onRVinfection.

ISSN1000-3061CN11-1998/Q生物工程学报ChinJBiotechhttp://journals.im.ac.cn/cjbcn1534图5蛋白B103在RV感染血清学诊断效果评价Fig.5Theevaluationofthediagnosticeffectofp....

本文编号：4022893