耳郭软骨细胞微载体的体外三维动态培养

发布时间：2025-06-20 00:41

　　 背景:软骨细胞是软骨组织工程最常用的种子细胞,但是如何在体外扩增的同时又能维持其良好的软骨表型是研究的重点和难点之一。目的:通过微载体动态培养法,明确三维动态培养对耳郭软骨细胞增殖和分化的影响,为建立规模化扩增方法提供技术参考。方法:应用胰酶、胶原酶消化法分离、培养猪耳软骨细胞,并将获得的软骨细胞分为3组:培养皿单层培养、微载体三维静止培养和微载体三维动态培养。应用扫描电镜、荧光倒置显微镜、DIO荧光染色、冰冻切片DAPI染色观察细胞在微球上生长情况,DNA定量检测软骨细胞增殖能力,Real-time PCR检测软骨相关基因表达差异。结果与结论:①第1代软骨细胞可快速贴附于CultispherG多孔微载体表面,微载体动态培养组细胞数量多于微载体静止培养组,而且微载体动态培养组细胞分布更为均匀;②培养皿单层培养时,软骨细胞在4d时进入平台期,微载体动态培养组软骨细胞对数生长期延长为2-10 d,细胞数量在14 d达到高峰,微载体静止培养组细胞增殖速度缓慢;③在长期体外培养中,二维培养和微载体静止培养软骨表型丧失,而微载体三维动态培养在促进细胞增殖的同时,能够维持软骨表型;④结果表明,微载...

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【部分图文】：

图4三种培养方法软骨分化相关基因表达量单层培养组0.40.201.00.500.151.00.80.050.040.030.020.01P<0.05ACAN相对表COL2相对表达(×SOX9相对表达(表达

7.3倍，微载体静止培养组细胞总量增加约2.2倍。在培养第14天，微载体动态培养组细胞数量显著高于另外2组(P<0.001)，培养皿单层培养组高于微载体静止培养组(P<0.05)。2.3软骨细胞表型相关基因表达各组软骨细胞培养21d时，软骨基质特异性基因ACAN和COL2相对表达....

图4三种培养方法软骨分化相关基因表达量1.00.50SOX9相对表达(

7.3倍，微载体静止培养组细胞总量增加约2.2倍。在培养第14天，微载体动态培养组细胞数量显著高于另外2组(P<0.001)，培养皿单层培养组高于微载体静止培养组(P<0.05)。2.3软骨细胞表型相关基因表达各组软骨细胞培养21d时，软骨基质特异性基因ACAN和COL2相对表达....

图2微球静止培养组和微球动态培养组培养21d时倒置显微镜、扫描电镜、DIO荧光、冰冻切片DAPI染色结果Figure2Resultsofinvertedmicroscope,electronmicroscope,DAPI染色μm200μm200

d时，软骨基质特异性基因ACAN和COL2相对表达量在微载体动态培养组表达最高，与其他2组比较差异有显著性意义。SOX9基因相对表达量在3组之间差异无显著性意义。COMP基因相对表达量在微载体动态培养组和微载体静止培养组之间差异有显著性意义，见图4。×4×10第1代第6代图注：第....

本文编号：4051164