广谱中和活性样本HIV-1膜蛋白及其突变毒株的中和特征研究

发布时间：2024-05-08 05:27

　　我们前期研究中,从具有广谱中和活性的HIV-1感染者(DRVI01)分离获得了一株针对CD4结合位点的VRC01样广谱单克隆中和抗体DRVIA7(A7)。系统分析A7连续5年间的发展表明,抗体重链在两年内快速成熟,但抗体轻链发展受阻于gp120蛋白LoopD区及V5区的糖链,导致该谱系抗体有限的中和宽度。如果能找到与A7谱系早期抗体结合的膜蛋白(Env),或通过Env改造设计中和难度逐渐加大的免疫原,或许能诱导出A7样抗体甚至帮助抗体越过糖分子障碍。本课题将在前期对A7抗体研究的基础上,系统分析感染者五年间6个时间点的病毒膜蛋白及其中和表型特征。第一部分对DRVI01感染者的膜蛋白基因及其中和特征研究中,我们通过单拷贝基因组扩增(SGA)技术获得156条全长膜蛋白基因,筛选鉴定出68个功能性膜蛋白并制备了假病毒。序列分析和假病毒中和实验显示,DRVI0]体内膜蛋白序列多样性的逐渐增加与A7谱系抗体的出现和成熟一致;广谱高效中和活性及自体病毒逃避同期血浆中和的能力,与膜蛋白上抗体识别位点较多的氨基酸变异一致,提示病毒和抗体间连续的共进化现象。序列分析还发现了几个可能有利于CD4bs抗体识...

【文章页数】：145 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１．?ＤＲＶＩ０１的膜蛋白Ｎ－Ｊ进化树图，包括六个时间点的１５６条膜蛋白序列和ＨＸＢ２

２．１膜蛋白基因系统进化分析??将六个时间点获得的膜蛋白基因序列和Ｂ亚型参考序列ＨＸＢ２通过ＭＥＧＡ５．０５构建??Ｎｅｉｇｈｂｏｕｒ－Ｊｏｉｎｉｎｇ进化树（图１），相同时间点的序列标记为同一种颜色。结果显示不同??时间点的序列相互交叉分布，提示ＨＩＶ－１在机体免疫压力下的连续进....

图２．Ｇｐｌ６０氨基酸长度、糖基化数目及ＮＸＴ：ＮＸＳ比值的比较

２．３膜蛋白序列长度及糖基化位点分析??为了分析膜蛋白的变化特征，我们比较了六个不同时间点的膜蛋白序列氨基酸长度??及糖基化数目，以及ＮＸＳ与ＮＸＴ的比值。如图２所示，六个时间点的膜蛋白氨基酸长??度比较恒定，相互间无显著差异。但六个时间点的糖基化数目变异较大，最后一个时间??点....

图３．ＤＲＶＩ０１膜蛋白ＶＲＣ０１抗体主要表位在六个时间点进化模式分析??３假病毒中和敏感性分析??

图３．ＤＲＶＩ０１膜蛋白ＶＲＣ０１抗体主要表位在六个时间点进化模式分析??３假病毒中和敏感性分析??使用五个时间点的功能性克隆构建的假病毒，分别和各时间点的自体血浆、六种代??表性单克隆ｂＮＡｂｓ及重构的Ａ７谱系抗体进行中和试验，以分析该病人膜蛋白的中和特??征。??３．１假病毒....

图１．?ｇｐｌ２０与ＶＲＣＯ丨复合物表面结构图，绿色部分为ｇｐｌ２０部分，棕色部分为ＶＲＣ０１轻链，??紫色为ＶＲＣ０１重链，方框部分为ｇｐｌ２０的ＬｏｏｐＤ区

?第：：部分实验结果??变引起的结构变化（图１、图２）。??１．５．１?ＬｏｏｐＤ区Ｄ２７９Ｅ、Ｋ２８１Ｒ突变株结构模拟分析??根据上述点突变和区域置换的结果，ＬｏｏｐＤ区的Ｄ２７９Ｅ、Ｋ２８１Ｒ突变以及Ｖ５区的??Ｅ４６４Ｔ突变是造成ＤＲＶＩ０１患者ＨＩＶ－１毒株对ＶＲＣ０１抵....

本文编号：3967564