柔嫩艾美耳球虫TA4-IL-2重组DNA疫苗的研制及安全性评价

发布时间：2024-05-25 04:55

　　鸡球虫病是一种由艾美耳属的球虫寄生在鸡肠道引起的原虫病,该病呈世界性分布、感染率高、危害性大。其中尤其以柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)致病力最强、造成的损失最为严重。目前鸡球虫病的防治主要依靠药物和少数几种活苗,但药物防治存在的耐药性和药物残留问题以及活苗存在的毒力返强、散毒等风险使得业内迫切需要研制一种新型的鸡球虫疫苗。本研究以柔嫩艾美耳球虫子孢子表面蛋白TA4基因为抗原分子,以甲病毒复制子载体pSMART2b为真核表达载体,串联鸡细胞因子IL-2作为佐剂,构建了重组质粒pSMART2b-TA4-IL-2,确定重组质粒p SMART2b-TA4-IL-2诱导鸡的免疫应答和抗柔嫩艾美耳球虫保护效果,最后对该疫苗进行了安全性评价。重组质粒pSMART2b-TA4-IL-2的构建、表达和鉴定首先PCR扩增EtTA4和鸡IL-2基因,然后融合PCR扩增TA4-IL-2基因并连接至pMD18-T克隆载体,最后将TA4-IL-2基因连接至pSMART2b载体。重组质粒经PCR、双酶切和测序鉴定正确后将重组质粒pSMART2b-TA4-IL-2转染至293T细胞后经Western...

【文章页数】：104 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1.1PCR扩增TA4基因

第二篇研究容第一章重组质粒pSMART2b-TA4-IL-2的构建、表和鉴定4℃过夜。TBST洗膜3次，每次15min。（6）二抗孵育：按照1:2000加HRP标记的山羊抗鸡IgG，室温摇床孵育50min。TBST洗膜5次，每次15min。....

图1.2PCR扩增IL-2基因Fig.1.1AmplificationoftheTA4genebyPCRFig.1.2AmplificationoftheIL-2genebyPCR

第二篇研究容第一章重组质粒pSMART2b-TA4-IL-2的构建、表和鉴定4℃过夜。TBST洗膜3次，每次15min。（6）二抗孵育：按照1:2000加HRP标记的山羊抗鸡IgG，室温摇床孵育50min。TBST洗膜5次，每次15min。....

图1.3融合PCR扩增TA4-IL-2基因Fig.1.3AmplificationoftheTA4-IL-2genebyfusionPCR

1.3融合PCR扩增TA4-IL-2基因lificationoftheTA4-IL-2genebyfuIL-2、pMD18-T-TA4-IL-2和pMD1BamHI和ClaI对重组质D18-T-TA4进行双酶切，结果分别条带，结果见图....

图1.4重组质粒的双酶切鉴定结果

1.3融合PCR扩增TA4-IL-2基plificationoftheTA4-IL-2genebyT-IL-2、pMD18-T-TA4-IL-2和pM酶BamHI和ClaI对重组pMD18-T-TA4进行双酶切，结果分的条带，结果见图1....

本文编号：3981733