共表达自杀基因联合多细胞因子基因的膀胱肿瘤特异性真核表达载体的构建和鉴定

发布时间：2025-06-21 01:23

　　目的：构建五种具有膀胱肿瘤特异性的双启动子重组真核表达载体,每种载体皆包含尿路斑块蛋白2(UroplakinⅡ, UPⅡ)启动子控制的单纯疱疹病毒胸腺激酶基因(herpes simplex virus thymidine kinase, HSV-TK)、并分别搭配人白细胞介素2(interleukin-2, IL-2).肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha, TNF-α)、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(Tumor Necrosis Factor-related Apoptosis-inducing, TRAIL)、融合基因IL-2-TNF-α、融合基因IL-2-TRAIL。 方法：以实验室保存的各种质粒为模板通过常规聚合酶链式反应技术(Polymerase Chain Reaction,PCR)分别扩增出UPⅡ启动子及HSV-TK基因、IL-2基因、TNF-α基因、TRAIL基因。用重叠延伸拼接技术将IL-2分别与TNF-α、TRAIL融合为融合基因IL-2-TNF-α(IT)、IL-2-TRAIL(ITR)。以上PCR所得各基因片段分别连接到真核载...

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
目录
前言
材料和方法
    1.1 实验材料
        1.1.1 质粒、载体和细菌菌株
        1.1.2 主要实验试剂
        1.1.3 实验试剂盒
        1.1.4 仪器及设备
        1.1.5 主要溶液及配制
    1.2 实验方法
        1.2.1 引物设计与合成
        1.2.2 目的基因扩增
        1.2.3 目的基因的克隆及测序
        1.2.4 构建共表达自杀基因和细胞因子基因的双启动子载体
结果
    2.1 目的基因扩增结果
    2.2 目的基因的克隆及测序结果
        2.2.1 目的基因的克隆结果
        2.2.2 目的基因的测序结果
    2.3 pBud-UPⅡ/CMV、pBud-UPⅡ-TK/CMV的鉴定
    2.4 共表达自杀基因和细胞因子基因双启动子载体的鉴定
        2.4.1 pBud-UPⅡ-TK/CMV-IL-2的鉴定
        2.4.2 pBud-UPⅡ-TK/CMV-TNF-α的鉴定
        2.4.3 pBud-UPⅡ-TK/CMV-TRAIL的鉴定
        2.4.4 pBud-UPⅡ-TK/CMV-IT的鉴定
        2.4.5 pBud-UPⅡ-TK/CMV-ITR的鉴定
讨论
结论
参考文献
成果
参与课题
致谢



本文编号：4051696