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细胞因子影响鼠卵透明带3 DNA疫苗免疫不育效果的研究

发布时间:2024-02-23 17:58
  哺乳动物受精过程中,卵子表面的透明带3(ZP3)蛋白作为精子初级受体,参与精子与卵子的结合并诱发顶体反应。ZP3特异性抗体能够与天然的ZP3结合从而阻断精卵结合导致不育。利用ZP3作为抗原制备的疫苗来诱导免疫不育是人类理想的避孕手段,也是控制动物生育的人道之选。长期以来,人们尝试利用不同类型的不育疫苗、发送途径及免疫佐剂增强ZP3疫苗的免疫反应,以开发出高效的避孕疫苗。DNA疫苗是一种安全、廉价、易于生产及保存的疫苗类型,在病毒性疾病的预防和控制方面得到了广泛的应用。本实验室前期的研究结果表明,肌肉注射和滴鼻免疫鼠ZP3 (mZP3) DNA疫苗均能导致小鼠不育,但DNA疫苗激发的体液免疫反应较弱,需要通过添加免疫佐剂来增强免疫不育的效果。增强树突状细胞(dendritic cells, DCs)对DNA疫苗的递呈效率,是提高DNA疫苗免疫原性的关键。粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor, GM-CSF)能够促进包括DCs在内的抗原递呈细胞(antigen presenting cells, APC...

【文章页数】:125 页

【学位级别】:博士

【部分图文】:

图3?GM-CSF和FIt3L对DC免疫原性相互影响的分子解释??通过激活STAT3,?F怕L促进了?1DO的表达抑制了?NF-kB和MHC-II的表达,因此抑制了?DC的??免疫原性

图3?GM-CSF和FIt3L对DC免疫原性相互影响的分子解释??通过激活STAT3,?F怕L促进了?1DO的表达抑制了?NF-kB和MHC-II的表达,因此抑制了?DC的??免疫原性

GM-CSF诱导的信号通路起始于JAK2,通过激活STAT5间接活化NF-kB或直接活??化NF-kB来促进DCs发育,尤其促进迁移性DCs的发育及致免疫活性,增强机体的固??有免疫应答。该核也信号通路中STAT5和NF-kB是关键的信号分子(图3)?W。??STAT5能够促进人....


图2重组质粒在小鼠巧脏内的瞬时表达??高压水动力转染化后提取赃脏mRNA反转录,并W?cDNA及未经反转录的RNA作为对照,??

图2重组质粒在小鼠巧脏内的瞬时表达??高压水动力转染化后提取赃脏mRNA反转录,并W?cDNA及未经反转录的RNA作为对照,??

出404bp的目的条带,而其它阴性对照或经PCDNA3.0转染后的肝脏cDNA均没有出现??目的条带。该结果表明,pcD-GM-CSF质粒能够在真核细胞中表达,可W用于后期的免??疫接种实验(图2)。??iHI??图2重组质粒在小鼠巧脏内的瞬时表达??高压水动力转染化后提取赃脏m....


图3?pcD-mZP3质粒双酶切结果??携带pcD-mZP3的菌液涂布LB板后挑取单克隆经EcoRI和Xbal双酶切鉴定:1,pcD-mZP3质??

图3?pcD-mZP3质粒双酶切结果??携带pcD-mZP3的菌液涂布LB板后挑取单克隆经EcoRI和Xbal双酶切鉴定:1,pcD-mZP3质??

用于免疫的mZP3DNA疫苗(pcD-mZP3)质粒由本实验室前期构建并保存tW。将??携带pcD-mZP3质粒的大肠杆菌复苏并大量扩増后用碱裂解法提取质粒DNA,并用双??酶切鉴定,经1%琼脂糖电泳检测可见1200bp左右目的条带(图3)。??33??


图5?pcD-?GM-CSF促进脾脏APCs成熟??RT-PC民检测共刺激因子CD80,CD83CD86在赃脏中的表达

图5?pcD-?GM-CSF促进脾脏APCs成熟??RT-PC民检测共刺激因子CD80,CD83CD86在赃脏中的表达

激因子CD80,?CD83,?CD%的表达情况。与未注射pcD-GM-CSF组相比,pcD-GM-CSF??提前4d处理或与pcD-mZP3同时注射均能促进脾脏组织中CD80,?CD83和CD86分子??的上调表达。而pcD-GM-CSF+pcD-mZP3注射组共刺激因子的表达水....



本文编号:3907745

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