CRISPR/Cas9系统介导的NF-κB敲除对鼻咽癌CNE-2免疫功能影响的研究

发布时间：2024-05-06 22:49

　　[目的]验证vIL-10通过NF-κB通路抑制MHC-I类分子抗原加工和提呈的“操纵子”表达。[方法]1.将NF-κB p65 CRISPR/Cas9 KO Plasmid(购于santa cruz)质粒转染人鼻咽癌低分化细胞CNE-2,以未转染荧光质粒的CNE2细胞作为对照,用流式分析仪分选出转染NF-κB p65 CRISPR/Cas9 KO Plasmid的细胞(带绿色荧光)。将挑选出的带绿色荧光的单细胞克隆培养后收集,Western blot检测单克隆中NF-κB p65的敲除情况,并建立NF-κB p65稳定敲除细胞株.RT-PCR、Western blot分别检测TAP1、 2, LMP2、7, HLA-ImRNA和蛋白质的表达情况。2.设计与构建BCRF-1的过表达载体。将PCMV-N-Flag质粒以及构建好的PCMV-N-Flag-BCRF质粒分别转染CNE-2细胞株和稳定敲除NF-κB p65的CNE-2细胞株。RT-PCR、Western blot分别检测TAP1、2, LMP2、7, HLA-I mRNA和蛋白质的表达情况。3.①将CNE2组(未处理组)设为A组；...

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