Toll样受体3在乙肝病毒致bewo细胞凋亡中的作用

发布时间：2017-06-06 12:16

  本文关键词：Toll样受体3在乙肝病毒致bewo细胞凋亡中的作用，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】： 目的 ①探索乙肝病毒能否在bewo细胞中复制,建立对乙肝病毒易感的细胞模型; ②探索乙肝病毒能否能使得bewo发生凋亡; ③探索TLR3是否在乙肝病毒致bewo细胞凋亡中起作用。 方法 ①bewo细胞与HBV DNA含量为5.0×106 (copies/ml)的血清共培养后,PCR检测细胞中HBV cccDNA的表达情况; ②通过流式细胞技术、TUNEL法检测细胞的凋亡情况,探讨能够使得bewo细胞发生凋亡的HBV DNA的剂量、作用时间; ③观察PolyI:C刺激对与HBV DNA阳性血清共培养的bewo细胞凋亡的影响,同时流式细胞技术检测TLR3蛋白的改变,推测TLR3在乙肝病毒致bewo细胞凋亡中所起的作用。 结果 ①与HBV DNA阳性血清共培养48小时后,PBS反复洗涤,继续生长24h、48h后bewo细胞中能够检测出HBV cccDNA; ②bewo细胞与50μl HBV DNA含量为5.0×106 (copies/ml)的血清共培养8h、24h、48h,早期凋亡率分别为4.34±3.42%、1.98±1.42%、6.58±3.44%,总凋亡率分别为10.78±5.36%、7.21±2.39%、16.35±9.61%,与同期对照组比较差别无统计学意义,P值均大于0.05; ③bewo细胞与100μl HBV DNA含量为5.0×106 (copies/ml)血清的共培养8h,早期凋亡率为5.55±1.80%,总凋亡率为10.88±2.33%,与对照组比较差别无统计学意义(P=0.064、P=0.997)。与100μl HBV DNA含量为5.0×106 (copies/ml)血清共培养24h、48h后,bewo细胞早期凋亡率分别为20.76±2.13%、24.23±6.87%,总凋亡率分别为25.58±2.11%、30.95±9.02%,凋亡指数分别为27.17±1.22%、30.47±1.92%,与对照组比较差别均有统计学意义,P值均小于0.001。 ④Poly I:C刺激后再与HBV DNA阳性血清共培养24h、48h,bewo细胞早期凋亡率分别为6.28±3.70%、6.25±1.35%,总凋亡率分别为7.69±3.71%、6.67±1.54%,均低于HBV DNA阳性血清直接刺激组,t检验差别有统计学意义(P值均小于0.05); ⑤PolyI:C刺激组bewo细胞TLR3蛋白平均荧光强度为36.0217±2.71701,对照组细胞为32.5852±1.40918,差别有统计学意义(P=0.02)。 结论 ①乙肝病毒能够在bewo细胞中复制,bewo细胞适合进行体外乙肝病毒感染试验; ②乙肝病毒能够使得bewo细胞发生凋亡,上调TLR3的表达,TLR3可能参与了乙肝病毒致bewo细胞凋亡的信号转导; ③PolyI:C刺激后上调了TLR3蛋白的表达,降低了与HBV DNA阳性血清共培养的bewo细胞的凋亡率。PolyI:C对TLR3的活化可能增强bewo细胞的抗病毒能力,减少凋亡的发生。
【关键词】：乙肝病毒 细胞凋亡 TLR3 bewo
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R512.62
【目录】：

• 常用缩写词中英文对照表6-7
• 摘要7-9
• Abstract9-11
• 前言11-14
• 第一章 乙型肝炎病毒体外感染 bewo 细胞的实验研究14-26
• 1. 材料14-16
• 1.1 实验用细胞和感染用血清及其处理14
• 1.2 主要试剂14
• 1.3 主要仪器14-15
• 1.4 主要试剂的配制15-16
• 2. 方法16-19
• 2.1 bewo 细胞的培养16-17
• 2.2 HBV 体外感染bewo 细胞的基本方法17-18
• 2.3 PCR 检测bewo 细胞中HBV cccDNA18-19
• 3. 结果19-24
• 3.1 人胎盘滋养层细胞系bewo 细胞体外生长曲线19-20
• 3.2 bewo 细胞形态学观察20-21
• 3.3 与HBV DNA 阳性血清共同培养的bewo 细胞形态21-23
• 3.4 PCR 检测bewo 细胞中HBVcccDNA23-24
• 4. 讨论24-26
• 第二章 Toll 样受体3 在乙型肝炎病毒致bewo 细胞凋亡中的作用26-41
• 1. 材料26-27
• 1.1 主要试剂26
• 1.2 主要仪器26
• 1.3 主要试剂配制26-27
• 2. 实验方法27-29
• 2.1 bewo 细胞的培养：见第一部分27
• 2.2 HBV DNA 阳性血清刺激 bewo 细胞凋亡方法27
• 2.3 Annexin V-FITC/PI 双染检测bewo 细胞的凋亡情况27
• 2.4 玻片防脱处理27
• 2.5 细胞爬片的制作27-28
• 2.6 TUNEL 法检测bewo 细胞的凋亡28
• 2.7 PolyI:C 体外刺激bewo 细胞28
• 2.8 流式细胞仪检测培养bewo 细胞TLR3 蛋白的表达28-29
• 2.9 统计分析方法29
• 3. 结果29-36
• 3.1 乙肝病毒对bewo 细胞凋亡的影响29-34
• 3.2 PolyI:C 刺激对bewo 细胞TLR3 蛋白表达的影响34-35
• 3.3 PolyI:C 刺激对乙肝病毒致bewo 细胞凋亡的影响35-36
• 4. 讨论36-41
• 4.1 乙肝病毒对bewo 细胞凋亡的影响36-38
• 4.2 TLR3 在病毒感染中的作用38-39
• 4.3 PolyI:C 的作用39-41
• 全文小结41-42
• 本文研究特色42-43
• 参考文献43-47
• 综述47-55
• 个人简介55-56
• 致谢56

【引证文献】

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 魏俊妮;胎盘细胞凋亡在HBsAg阳性孕妇PBMC母—胎转运机制中的作用[D];山西医科大学;2012年

中国硕士学位论文全文数据库 前4条

1 张s，

本文编号：426354