白细胞介素-8对缺血心肌血管新生的影响及其机制研究

发布时间：2024-02-01 10:34

　　第一章白细胞介素-8(IL-8)基因过表达慢病毒载体构建 摘要：目的：冠状动脉粥样硬化性心脏病(简称冠心病)是威胁中国公众健康的重要疾病。研究发现,冠心病患者产生的冠状动脉侧支循环(CCC),有利于维持心肌活力,保护心功能。大量的动物实验证实了VEGF、bFGF等促血管生长因子蛋白和基因(质粒、腺病毒)应用于缺血心肌可促进缺血区侧支血管生长,代偿性替补供血血管,增加缺血心肌灌注,减小梗死面积,改善心功能。早期研究发现IL-8在炎症中起重要作用,随着对IL-8及其受体生物学活性和作用机制研究的深入,发现它还具有促有丝分裂与血管生成的作用,但IL-8是否具有促进心肌缺血区侧支血管生长,增加缺血心肌灌注未见有文献报道。本实验拟构建IL-8基因过表达慢病毒载体,为研究IL-8在缺血心肌血管新生中的作用奠定基础。 方法：从购买的cDNA文库中,利用PCR方法钓取IL-8目的基因。将IL-8目的基因与酶切线性化的慢病毒载体进行定向交换,其产物转化细菌感受态细胞。对长出的克隆先进行菌落PCR鉴定,再对PCR鉴定阳性的克隆进行测序和比对分析,比对正确的克隆即为构建成功的目的质粒。然后将构建好的融合蛋白...

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【部分图文】：

图1-1pGC-FU基础栽体

每次在延伸阶段读取吸光值；溶解曲线制作：PCR结束后，95°C变性1分钟。然后冷却至55°C，5°C，每一步增加0.5°C，保持30秒，同时读取吸光值。果与附图

图1-5载体酵切图谱

糖凝胶电泳图谱：

图1-6阳性克隆的PCR鉴定图谱

图1-6阳性克隆的PCR鉴定图谱1#阴性对照（ddHzO)2#阴性对照（空载自连对照组）3#阳性对照（GAPDH)4#Marker5kb,3kb,2kb,1.5kb,1Kb,750bp,500bp,250bp,100bp5#~12#IL....

图1PI3K-Akt信号通路.

图1PI3K-Akt信号通路.PDK-Akt的负调控磷脂酰肌醇PI的肌醇环上有5个位点可被磷酸化，不同位点的磷酸化胞的功能具有不同的重要影响。反之，磷酸化肌醇产物脱磷酸后部分功或消失。研究表明PI3K-Akt信号通路的活性被类脂磷酸酶PTEN(phosphatensinho....

本文编号：3891973