酿脓链球菌LAMP快速检测技术研究

发布时间：2019-10-24 19:47

【摘要】：酿脓链球菌是一种常见的食源性致病菌,它能够引起猩红热、脓疱疮、儿童急性咽炎等一系列感染,而且可以通过食物、水源和空气等途径传播,快速准确的鉴定是控制这些感染的关键。常用的酿脓链球菌检测方法有培养分离法、免疫学方法和PCR等,这些方法有一定的限制,很难应对突发紧急卫生事件,因此,需要一种更加快速、灵敏、便捷的新方法。本研究以酿脓链球菌特异转录调控基因Spy1258为靶基因进行引物设计,对酿脓链球菌环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测的最佳引物、反应最佳温度进行分析筛选,对其特异性和敏感性进行测定,建立一套完整的酿脓链球菌LAMP检测体系,并用LMAP法对收集于北京市的30株菌株进行检测,并对阳性菌株进行emm基因分型。主要结论如下:选择Primer Explorer V4软件设计了三套引物SP-36、SP-84和SP-106,以酿脓链球菌DNA为模板,进行LAMP反应,试验结果表明,引物SP-106为最佳引物,64℃为最佳反应温度,引物SP-106对Spy1258基因具有良好的特异性,酿脓链球菌LAMP检测方法敏感性是PCR法的10倍,对酿脓链球菌DNA最低检测浓度达到1.486 pg/μl。用建立的LAMP方法对30株样本进行检测,30株样本均为酿脓链球菌,emm基因分型结果表明,30株酿脓链球菌被分成emm1、emm4、emm12和emm58四种emm型,其中emm12和emm1所占比例最大,达到83.3%。LAMP技术能够检测酿脓链球菌,而且更加灵敏和便捷,节省时间和成本,可成为一种有效的酿脓链球菌检测方法。
【学位授予单位】：西北农林科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R155.5;Q93

【参考文献】