清瘟败毒饮干预大鼠急性肺损伤的药效物质基础研究Ⅱ

发布时间：2020-03-18 03:21

【摘要】：各种致病因素引起炎细胞在肺内大量积聚、过度表达和释放炎症介质等,使肺毛细血管通透性增加而导致急性肺损伤(Acute Lung Injury,ALI)的发生。特别是在SARS、H7N9等新型禽流感类传染病大肆侵袭期间,重期的应激性肺损伤是大多数患者死亡的原因。中医温病学辩证,SARS、H7N9等流行性传染性疾病属“疫”证,其发生发展规律与温病学专著《温热论》中热病的临床传变过程一致;ALI发生于危重阶段,属温病营血分证,热毒深入营血分,应根据“卫气营血”阶段的不同,早期应用清热解毒方药急挫热势;治疗应立足于清热解毒、泻火凉血。清瘟败毒饮具有大清气血热毒的作用,主治热毒充斥、气血两蟠证,为临床常用治疗传染性疾病(“疫”证)的方剂。ALI发病急骤,病程难控,临床尚缺乏快速有效地预防、治疗药物。清瘟败毒饮为临床有效治疗药物的发现提供了新思路。因此,本课题拟从清瘟败毒饮中寻找有效治疗药物。依据药效作用特点,拆方配伍,筛选最佳拆方;采用偏最小二乘回归法分析最佳拆方的“谱”“效”相关性,获得药效成分,以期寻找到ALI的有效治疗药物,并指导临床合理用药。本论文的研究内容如下:第一部分对清瘟败毒饮进行拆方配伍研究,筛选最佳拆方组对课题组前期优选出的清热方-清瘟败毒饮进行拆方配伍研究,综合分析不同拆方组干预大鼠急性肺损伤的药效学表现,以期优选出疗效良好的拆方进行药效物质基础研究。结果显示:较模型组,C1、C2和C3组BALF中的PMNs及WBC数量显著降低(P0.05),以C3组效果最佳(P0.01);C1、C2与C3组的蛋白浓度显著降低(P0.05),以C2组最为显著(P0.01);C1、C2和C4组的TNF-α含量显著降低(P0.05),以C1组最佳(P0.01);各拆方组均能显著降低W/D值(P0.01),以C3组最为显著(P0.01)。可见,“清瘟败毒饮”的“清热泻火”-C1组、“情热凉血”-C2组和'清热燥湿”-C3组均能够显著改善LPS所致ALI大鼠的病理状态。文献查阅发现,C3组药材-黄芩和黄连的相关研究较为成熟,故课题组选择了疗效良好的C1和C2组拆方进行药效物质基础研究。而本课题则主要进行C1-“清热泻火”组的药效物质基础研究。第二部分运用偏最小二乘回归法分析,获得功效成分对“清热泻火”组的不同提取物进行干预大鼠急性肺损伤的药效学实验,并同时进行其HPLC特征图谱的建立。运用偏最小二乘回归法分析拆方组的不同提取物平行药理指标与对应HPLC图谱信息的多元相关性,找到该拆方组干预大鼠急性肺损伤的功效成分组。结果显示,峰X4、X6、X9、X14、X16、X17影响ALI大鼠BALF中白细胞和中性粒细胞减少的累积药效贡献率达88.76%,推测其为“功效成分组”;峰X3、X7、X8、X10、X13、X19、X20影响ALI大鼠BALF中蛋白浓度降低的累积药效贡献率达84%,推测其为“功效成分组”;峰X3、X7、X8、X10、X11、X18、X19、X21影响ALI大鼠肺湿干比值降低的累积药效贡献率达85%,推测其为“功效成分组”,有待进一步药效验证。第三部分功效成分的LC-MS/MS分析、分离和结构鉴定找到干预大鼠急性肺损伤的功效成分组中各成分所对应的HPLC图谱信息,进行LC-MS/MS分析,初步确定各功效成分的化学结构。为进一步确认各功效成分化学结构,经各功效成分单体的分离制备,欲通过核磁共振等分析技术确认其结构。根据LC-MS总离子流图以及二级离子碎片图,结合标准品比对及相关文献查阅,共解析出18个化合物。其中干预ALI大鼠白细胞和中性粒细胞减少的“功效成分”峰X4、X6、X9、X14、X16、X17依次为去乙酰基车前草酸、鸡屎藤次苷甲酯、Jasminoside B、Jasminoside E、异芒果苷和芦丁。通过HPLC和TLC法定位分离功效成分,得到了芦丁、京尼平-1-β-龙胆双糖苷、京尼平苷、槲皮素、β-谷甾醇、鸡屎藤次苷甲酯和西红花苷-Ⅰ,共7个单体化合物。HPLC图谱显示:峰X6为鸡屎藤次苷甲酯,峰X10为京尼平-1-β-龙胆双糖苷,峰X13为京尼平苷,峰X17为芦丁,峰X19为西红花苷-Ⅰ,与LC-MS/MS分析推测结果一致;并进一步确认了干预ALI大鼠白细胞和中性粒细胞减少的功效成分X6和X17分为鸡屎藤次苷甲酯和芦丁。综上所述,谱-效分析得出清瘟败毒饮清热泻火组干预ALI大鼠白细胞和中性粒细胞减少的功效成分为鸡屎藤次苷甲酯和芦丁,与文献报道相符,其药效有待进一步验证;而功效成分X6、X9、X14和X16的结构有待鉴定。可见本论文为临床治疗ALI提供了新的研究方向,同时也证实了本论文谱-效分析所得结果的可靠性。
【图文】：

空白,给药,含量变化,模型

空白逦模型逦Ｃｌ逦Ｃ２逦Ｃ３逦Ｃ４逦阳性逡逑注：与空白组比较，＃＃尸＜邋０．０１，与模型组比较，＜０．０５，逡逑图３．３大鼠ＢＡＬＦ中ＴＮＦ－ａ含量变化逡逑３．４各组大鼠肺Ｗ／Ｄ值逡逑表３．４显示，空白组大鼠肺Ｗ／Ｄ值较小，而模型组较空白组Ｗ／Ｄ值显著变逡逑大（Ｐ＜邋０．０１），表示造模成功；较模型组，给药组各组Ｗ／Ｄ值均显著降低（Ｐ＜逡逑０．０１），以Ｃ３组最为显者。逡逑表３．４各组大鼠肺Ｗ／Ｄ值（５±ｓ，ｎ＝１０）逡逑Ｎｏ．逦Ｗ／Ｄ邋（ｇ．ｇ－丨）逡逑空白逦４．５１±０．０６逡逑模型逦４．８５±０．０９＃＃逡逑Ｃｌ逦４．６１±０．０６＊＊逡逑Ｃ２逦４．５９±0．0５＊＊逡逑Ｃ３逦４．５７士邋０．０９＊＊逡逑Ｃ４逦４．６７±０．０７＊＊逡逑阳性逦４．５２±０．１＊＊逦逡逑注：与空白组比较，＃＃尸＜０．０１，与模型组比较，，＊＊尸＜０．０１。逡逑３９逡逑

急性肺损伤,大鼠,空白

清瘟败毒饮干预大鼠急性肺损伤的药效物质基础研宄ｎ逡逑Ａ３逦４．４８±０．０５６３＊＊逡逑Ａ４逦４．３９９±０．０４９３＊＊逡逑Ａ５逦４．４４８±0．0４６４＊＊逡逑Ａ６逦４．４７２士邋０．０６１３＊＊逡逑阳性逦４．３５６土０．０４６９＊＊逡逑注：与模型组比较＊＊尸＜０．０１；与空白组比较＃＃尸＜０．邋０１。逡逑
【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5

【相似文献】