韭菜有效成分的提取及生物活性研究

发布时间：2020-03-25 01:36

【摘要】：本课题以韭菜地上部分作为研究对象,以Vc为阳性对照,采用普鲁士蓝法、邻二氮菲-Fe~(2+)氧化法、邻苯三酚自氧化法、DPPH法、ABTS法研究韭菜地上部分不同极性部位的抗氧化活性;利用水蒸气蒸馏法、单因素和正交试验优化研究了韭菜挥发油的提取工艺及蒜氨酸酶对挥发油成分的影响;采用纸片法和超微药粉琼脂稀释法研究了韭菜地上部分不同极性部位和挥发油的抗菌作用;在上述基础上,利用MTT法研究韭菜地上部分不同极性部位与挥发油对RAW和SiHa细胞的体外抑制作用。具体结果如下:(1)从韭菜地上部分干燥粉末中加入75%乙醇溶液以料液比1:8(g/mL)和1:3(g/mL)回流两次,将浓缩后的乙醇溶液依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取,得到乙醇相、石油醚相、乙酸乙酯相、正丁醇相和水相五个不同的极性部位。韭菜的五种提取物均具有一定体外抗氧化能力。其中,总还原能力大小顺序为:水相乙醇相≈乙酸乙酯相≈正丁醇相石油醚相;·OH清除能力大小顺序为:乙醇相乙酸乙酯相石油醚相正丁醇相水相;O~(2-)清除能力大小顺序为:乙醇相≈石油醚相≈乙酸乙酯相正丁醇相水相;DPPH·清除能力大小顺序:乙醇相≈正丁醇相乙酸乙酯相水相(低浓度)石油醚相;ABTS~+·清除能力大小顺序为:乙酸乙酯相乙醇相正丁醇相水相石油醚相。实验结果说明,韭菜乙醇相和乙酸乙酯相的抗氧化效果较好。(2)从新鲜韭菜中提取挥发油的最佳工艺条件为:料液比1:0.5(g/mL)70℃水浴灭酶后40℃水浴保温30 min,超声40 min,利用挥发油提取器提取6 h,馏出液冰盐水冷却后进行酶解处理,用二氯甲烷进行萃取后挥干试剂。该条件下新鲜韭菜挥发油提取率为0.0388%,制备的挥发油澄明无杂质,色泽亮黄且具有浓烈的韭菜气味。GC-MS结果显示,酶解处理的韭菜挥发油中含硫量(88.18%)稍高于未酶解处理的挥发油(87.52%),主要成分均为二甲基二硫和二甲基三硫。(3)韭菜六种不同极性部位及挥发油对于鲍曼不动杆菌、肺炎链球菌、枯草芽孢杆菌、苏云金杆菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、粪肠球菌均有明显的抑制作用。乙醇相对肺炎链球菌有着较好的抗菌杀菌作用,其MIC值为0.0025 g/mL,MBC值为0.03g/mL;石油醚相对肺炎链球菌、枯草芽孢杆菌和粪肠球菌有着较好的抑菌效果,其MIC值可达到0.005 g/mL;石油醚相、乙酸乙酯相、正丁醇相、水相对粪肠球菌的杀菌效果相当,MBC值最低达到0.02g/mL;乙酸乙酯相、正丁醇相、水相分别对金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、枯草芽孢杆菌有着较好的抑菌效果,其MIC值均为0.0025 g/mL。超微药粉琼脂稀释法较纸片法更加简便快捷,处理量大,节约实验成本。(4)韭菜的六种提取物对RAW 264.7抗炎细胞无细胞毒害作用;对SiHa肿瘤细胞具有一定的抑制作用,并显示了浓度和时间的依赖性。100μg/mL样品溶液作用于SiHa细胞72 h时,抑制率大小顺序为:乙酸乙酯相㧐乙醇相㧐石油醚相㧐正丁醇相㧐水相㧐挥发油,其中乙酸乙酯相对SiHa细胞的抑制率为29.93%,挥发油的抑制率最低仅为18.57%。综上,本课题对韭菜不同极性部分进行抗氧化活性比较,各相均具有一定的体外抗氧化能力;优化了韭菜挥发油提取工艺,并明确了蒜氨酸酶酶解有利于提高韭菜挥发油的含硫量;证明了韭菜具有抗菌能力,其中乙酸乙酯相和正丁醇相效果较好;考察了韭菜不同提取物对SiHa及RAW细胞的影响,证明乙酸乙酯相对SiHa细胞有较好的抑制作用,各样品对RAW细胞均无细胞毒作用。
【图文】：

韭菜,还原能力

2.4 结果与分析2.4.1 总还原能力由图2-1可知，在总还原能力的测定中，韭菜不同极性部位与Vc相差较大，，后者的总还原能力显著强于前者韭菜各相提取物。韭菜各

韭菜,部位,清除率,样品浓度

Fig.2-2 The scavenging ability of different polar parts of Chinese chive on hydroxylradicals由图2-2可知，韭菜各不同极性部位对·OH清除率的趋势类似，清除率均随浓度增加而升高呈现明显的剂量依赖性，在低浓度时（<0.6g/mL）清除率均低于阳性对照Vc，而当样品浓度达到1.0 g/mL时，乙醇相和乙酸乙酯相的·OH清除率分别达到73.2%和67
【学位授予单位】：武汉工程大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R284.2

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本文编号：2599185

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