五子衍宗丸对大鼠热激生精障碍的干预作用和机制研究

发布时间：2017-08-05 20:00

  本文关键词：五子衍宗丸对大鼠热激生精障碍的干预作用和机制研究

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【摘要】：目的：男性不育是现在临床常见的疾病,且发病比率在逐年上升,目前已成为影响人类健康与社会发展的全球性医学和社会问题。引起男性不育的原因很多,如精子发生或成熟障碍、输精管梗阻、性功能障碍、附属性腺异常、生殖道感染或免疫性因素等,其中生精障碍是最主要的原因,而睾丸局部高温是目前公认的对男性生殖能力有极大破坏力的关键因素之一。中医认为肾藏精,主生殖。历代医家认为肾精在男性生殖中发挥重要作用,并认为肾精的盛衰决定了男子的生育能力。肾精亏虚是引起男性生精障碍的主要原因,五子衍宗丸作为治疗肾精亏虚型男性不育的经典方,被历代医家盛誉为“古今种子第一方”。目前五子衍宗丸的临床应用及动物实验疗效确切,然而对于五子衍宗丸改善生精功能的作用机制尚不明确,通过探索其改善男性生精障碍的作用机制以期为临床男性不育的防治提供新的靶点和思路。本课题以大鼠睾丸局部热激(43℃,20min)制备生精障碍模型,探讨五子衍宗丸对热激生精障碍的干预作用,并深入研究其干预机制,以期为临床男性不育的防治提供新的靶点和思路。方法：1.35只60天龄雄性Wistar大鼠随机分为五组：对照组、模型组、五子衍宗丸低剂量组、五子衍宗丸中剂量组、五子衍宗丸高剂量组,五子衍宗丸低、中、高剂量组每天分别给予418 mg/kg、836 mg/kg、1672 mg/kg剂量五子衍宗丸溶液灌胃,对照组和模型组给予同等体积的去离子水,连续灌胃15天后造模。腹腔注射10%的水合氯醛(0.3ml/100g)麻醉,之后将大鼠睾丸置于43℃(对照组22℃)恒温水浴锅内局部热激20min,热激后30min取材,并称取睾丸重量。2.放射免疫分析法检测大鼠血清卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)和睾酮(T)的水平。3.免疫组织化学法检测大鼠睾丸组织中Ki67的表达分布。4.DNA断裂的原位末端标记(TUNEL)法检测生精细胞凋亡。5.透射电子显微镜观察曲细精管超微结构的变化。6.蛋白印迹法(Western Blot)检测睾丸组织中Akt、p-Akt、CK-18、AR、EPO及EPOR蛋白表达量的变化。结果：实验一：五子衍宗丸各剂量组与模型组、对照组比较血清FSH和LH均没有明显差异。热激后模型组的血清T水平降低,但与对照组比较没有统计学差异(P0.05)；五子衍宗丸各剂量组与模型组相比,血清T水平升高,其中五子衍宗丸低剂量组升高明显(P0.05),五子衍宗丸中剂量组最接近于对照组。对照组大鼠曲细精管内少见凋亡阳性细胞,各细胞形态、结构完整,细胞之间连接紧密,且Ki67蛋白阳性细胞较多。热激后模型组大鼠曲细精管内可见大量凋亡阳性细胞,出现大量空泡,曲细精管结构疏松,并且Ki67蛋白阳性细胞急剧减少,睾丸重量显著降低(P0.01)；而与模型组相比,五子衍宗丸各剂量组大鼠曲细精管内凋亡阳性细胞减少(其中尤以五子衍宗丸中剂量组大鼠曲细精管内凋亡阳性细胞减少更明显),各细胞形态、结构基本完整,且Ki67蛋白阳性细胞显著增多(其中尤以五子衍宗丸低、中剂量组大鼠曲细精管内Ki67蛋白阳性细胞增多更明显),睾丸重量都显著提高(P0.01)。实验二：Western Blot结果表明,模型组睾丸组织中p-Akt蛋白的相对表达量在热激后显著降低(P0.01)；而与模型组相比,五子衍宗丸中剂量组睾丸组织中p-Akt蛋白的相对表达量提高(P0.05)。CK-18的结果表明,对照组睾丸组织中很少见CK-18蛋白表达；热激后模型组睾丸组织中CK-18蛋白的相对表达量显著增加(P0.01)；而与模型组相比,五子衍宗丸各剂量组睾丸组织中CK-18蛋白的相对表达量显著降低(P0.01)。AR的结果表明,对照组睾丸组织中AR蛋白表达明显；模型组睾丸组织中AR蛋白的相对表达量在热激后显著降低(P0.01)；而与模型组相比,五子衍宗丸低剂量组与中剂量组睾丸组织中AR蛋白的相对表达量显著升高(P0.01)。EPO结果表明,热激后模型组睾丸组织中EPO蛋白的相对表达量显著降低(P0.01),而与模型组相比,五子衍宗丸各剂量组睾丸组织中EPO蛋白的相对表达量显著提高(P0.01)。EPOR结果表明,热激后模型组睾丸组织中EPOR蛋白的相对表达量没有显著变化；而与模型组相比,五子衍宗丸各剂量组睾丸组织EPOR蛋白的相对表达量显著提高(P0.01)。结论：1.五子衍宗丸可有效地预防热激引起的大鼠生精细胞凋亡,改善曲细精管超微结构病理变化,并保护热激条件下生精细胞的增殖活性。2.五子衍宗丸可能通过刺激促红细胞生成素(EP0)及其受体,使其表达增加,从而调控AR与T的表达,促进支持细胞分化和生精细胞增殖,有效地预防热激造成的生精细胞凋亡与曲细精管超微结构病理变化,从而保护睾丸功能,改善热激生精障碍,而此过程可能与Akt信号通路密切相关。
【关键词】：促红细胞生成素 热激 生精障碍 五子衍宗丸
【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R277.5
【目录】：

• 摘要5-8
• Abstract8-12
• 符号说明12-13
• 第一部分 文献综述13-37
• 综述一 五子衍宗丸的研究进展13-20
• 1 五子衍宗丸的药理研究13-14
• 2 五子衍宗丸的临床研究14-16
• 3 结语16-17
• 参考文献17-20
• 综述二 睾丸温度升高对精子发生的影响20-31
• 1 睾丸温度调节系统20
• 2 导致睾丸温度升高的主要因素20-22
• 3 睾丸温度升高可导致生精细胞凋亡22-24
• 4 睾丸温度升高可抑制精原细胞增殖24-25
• 5 结语25-26
• 参考文献26-31
• 综述三 促红细胞生成素的研究进展31-37
• 1 抗炎作用31
• 2 抗凋亡作用31-32
• 3 抗氧化应激作用32
• 4 免疫调节作用32-33
• 5 结语33-34
• 参考文献34-37
• 前言37-39
• 第二部分 实验研究39-64
• 实验一 五子衍宗丸对大鼠热激生精障碍干预作用的研究39-54
• 1 材料39-40
• 2 方法40-46
• 3 结果46-51
• 4 小结51-52
• 5 讨论52-54
• 实验二 五子衍宗丸对大鼠热激生精障碍干预机制的研究54-64
• 1 材料54-55
• 2 方法55-58
• 3 结果58-61
• 4 小结61-62
• 5 讨论62-64
• 结语64-65
• 参考文献65-70
• 附录70-71
• 致谢71-72
• 在校期间主要研究成果72-73
• 个人简历73

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本文编号：626650