TCDCA与糖皮质激素受体的相互作用及其对活化蛋白-1的影响
发布时间：2025-07-18 21:41
牛磺鹅去氧胆酸(Taurochenodeoxycholic Acid, TCDCA)广泛存在于动物胆汁中,是动物胆汁酸的有效成分之一,具有显著的抗炎及免疫调节作用。TCDCA在结构上具有环戊烷多氢菲的基本母核,与甾体激素具有相似的化学结构。为了更加深入揭示TCDCA的抗炎免疫调节作用机制,本研究以佐剂性关节炎(Adjuvant arthritis,AA)模型大鼠成纤维样滑膜细胞(Fibroblast-like synoviocytes,FLS)为研究对象,探讨了TCDCA与糖皮质激素受体(Glucocorticoid receptor,GR)的相互作用及其对转录因子活化蛋白1(Activator protein-1,AP-1)和AA大鼠FLS细胞凋亡的影响。具体研究内容如下： (1) TCDCA与GR的相互作用 采用Autodock软件将TCDCA与GR进行分子对接研究；采用萤光素酶报告基因法检测GR的激活情况：采用荧光显微镜追踪GR核移位。研究结果显示,TCDCA能够与GR732位上的亮氨酸以氢键发生相互作用,其结合吉布斯自由能变为-4.51kcal/mol,解离常数Kd=49...
【文章页数】：109 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
插图和附表清单
缩略词表
第一章 引言
1 胆汁酸的研究概况
1.1 胆汁酸的来源与分类
1.2 BAs的代谢
1.3 BAs的生理功能
1.4 与BAs作用相关的受体
2 TCDCA的研究概况
2.1 TCDCA的理化性质
2.2 TCDCA的药理学研究概况
2.2.1 TCDCA的药效学研究概况
2.2.2 TCDCA的药动学研究概况
2.2.3 TCDCA的作用机制
3 GR的研究概况
3.1 糖皮质激素的概况
3.1.1 GCs的来源和分泌调节
3.1.2 GCs的药理作用
3.2 GCs的作用机制
3.2.1 GCs的抗炎作用机制
3.2.2 GCs的免疫抑制作用机制
4 分子对接的研究概况
4.1 分子对接的基本原理
4.2 分子对接方法的分类
4.3 分子对接软件
5 RA的研究概况
5.1 RA发病原因
5.2 成纤维样滑膜细胞在RA中的作用
5.3 免疫细胞在RA中的作用
5.4 ICAM-1在RA中的作用
5.5 RA的治疗
5.5.1 西医对RA的治疗
5.5.2 中医对RA的治疗
5.5.3 其他治疗方法
5.6 RA动物模型
6 细胞凋亡的研究概况
6.1 细胞凋亡发生的过程
6.2 细胞凋亡的分子机制
6.2.1 细胞凋亡相关基因
6.2.2 Fas与FasL在凋亡中的作用
6.2.3 Caspases依赖性的细胞凋亡
6.2.4 非Caspases依赖性的细胞凋亡
6.2.5 内质网介导的细胞凋亡信号转导途径
6.3 常用细胞凋亡的检测方法
6.3.1 细胞和亚细胞水平的形态学检测
6.3.2 DNA Ladder
6.3.3 TUNEL
6.3.4 Annexin V/PI
6.3.5 检测Caspases活性
6.4 细胞凋亡与RA
7 本研究的目的及意义
第二章 TCDCA与GR相互作用的研究
1 试验材料
1.1 药品与试剂
1.2 质粒与细胞
1.3 主要仪器设备
2 数据处理和统计分析
3 试验内容和方法
3.1 TCDCA与GR分子对接研究
3.1.1 准备受体文件
3.1.2 准备配体文件
3.1.3 准备Grid文件
3.1.4 分子对接
3.2 TCDCA对GR移位的观察
3.2.1 重组真核表达质粒pEGFP-C1-GR的构建
3.2.2 细胞转染
3.3 TCDCA对GR活化的影响
4 结果
4.1 TCDCA与GR的分子对接
4.2 TCDCA对GR核移位的影响
4.2.1 重组真核表达质粒pEGFP-C1-GR的构建
4.2.2 TCDCA对GR核移位的观察
4.3 TCDCA对GR活化的影响
5 讨论
6 小结
第三章 TCDCA对AP-1及ICAM-1表达与活性的影响
1 试验材料
1.1 药品与试剂
1.2 试验动物
1.3 主要仪器设备
2 数据处理和统计分析
3 试验内容和方法
3.1 细胞培养
3.1.1 AA大鼠模型的建立
3.1.2 滑膜组织的分离与采集
3.1.3 成纤维样滑膜细胞的分离培养
3.2 TCDCA对IL-1β刺激下AA大鼠FLS中AP-1蛋白表达的影响
3.2.1 分组与给药
3.2.2 细胞蛋白提取
3.2.3 蛋白定量
3.2.4 Western blot
3.3 TCDCA对IL-1β刺激下AA大鼠FLS中AP-1 DNA结合活性的影响
3.3.1 分组与给药
3.3.2 细胞核蛋白提取
3.3.3 蛋白定量
3.3.4 AP-1活性检测
3.4 TCDCA对IL-1β刺激下AA大鼠FLS中ICAM-1表达的影响
3.4.1 分组与给药
3.4.2 TCDCA对IL-1β刺激下AA大鼠FLS中ICAM-1 mRNA表达的影响
3.4.3 TCDCA对IL-1β刺激下AA大鼠FLS ICAM-1蛋白表达的影响
4 结果
4.1 AA大鼠模型的建立
4.2 AA大鼠FLS细胞的培养
4.3 蛋白浓度的测定
4.4 TCDCA对AP-1表达的影响
4.5 TCDCA对AP-1 DNA结合活性的影响
4.6 TCDCA对ICAM-1表达的影响
4.6.1 TCDCA对ICAM-1基因表达的影响
4.6.2 TCDCA对ICAM-1蛋白表达的影响
5 讨论
5.1 AA大鼠模型的建立及FLS细胞的分离培养
5.2 TCDCA对FLS细胞中AP-1的影响
5.3 TCDCA对FLS细胞中ICAM-1的影响
6 小结
第四章 TCDCA对AA大鼠FLS细胞凋亡的影响
1 试验材料
1.1 药品与试剂
1.2 试验动物
1.3 主要仪器设备
2 数据处理和统计分析
3 试验内容和方法
3.1 细胞培养
3.1.1 AA大鼠模型的建立
3.1.2 滑膜组织的分离、采集
3.1.3 成纤维样滑膜细胞的分离培养
3.2 TCDCA对FLS细胞凋亡的影响
3.2.1 分组与给药
3.2.2 TCDCA对FLS细胞凋亡率的影响
3.2.3 TCDCA对caspase-3、caspase-8 mRNA表达量的影响
3.2.4 TCDCA对Caspase-3、Caspase-8活性的影响
4 结果
4.1 TCDCA对FLS细胞凋亡率的影响
4.2 TCDCA对FLS细胞中caspase-3、caspase-8基因表达量的影响
4.2.1 总RNA的电泳检测
4.2.2 β-actin、caspase-3、caspase-8扩增效率曲线情况
4.2.3 β-actin、caspase-3、caspase-8基因qPCR扩增曲线和溶解曲线
4.2.4 PCR产物电泳检测及测序结果
4.2.5 序列测定
4.2.6 FLS 细胞中 caspase-3、caspase-<9基因的表达量
4.3 TCDCA对FLS细胞中Caspase-3、Caspase-8活性的影响
5 讨论
6 小结
全文讨论
全文结论
本课题主要创新之处
致谢
参考文献
作者简介
本文编号：4057465
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【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
插图和附表清单
缩略词表
第一章 引言
1 胆汁酸的研究概况
1.1 胆汁酸的来源与分类
1.2 BAs的代谢
1.3 BAs的生理功能
1.4 与BAs作用相关的受体
2 TCDCA的研究概况
2.1 TCDCA的理化性质
2.2 TCDCA的药理学研究概况
2.2.1 TCDCA的药效学研究概况
2.2.2 TCDCA的药动学研究概况
2.2.3 TCDCA的作用机制
3 GR的研究概况
3.1 糖皮质激素的概况
3.1.1 GCs的来源和分泌调节
3.1.2 GCs的药理作用
3.2 GCs的作用机制
3.2.1 GCs的抗炎作用机制
3.2.2 GCs的免疫抑制作用机制
4 分子对接的研究概况
4.1 分子对接的基本原理
4.2 分子对接方法的分类
4.3 分子对接软件
5 RA的研究概况
5.1 RA发病原因
5.2 成纤维样滑膜细胞在RA中的作用
5.3 免疫细胞在RA中的作用
5.4 ICAM-1在RA中的作用
5.5 RA的治疗
5.5.1 西医对RA的治疗
5.5.2 中医对RA的治疗
5.5.3 其他治疗方法
5.6 RA动物模型
6 细胞凋亡的研究概况
6.1 细胞凋亡发生的过程
6.2 细胞凋亡的分子机制
6.2.1 细胞凋亡相关基因
6.2.2 Fas与FasL在凋亡中的作用
6.2.3 Caspases依赖性的细胞凋亡
6.2.4 非Caspases依赖性的细胞凋亡
6.2.5 内质网介导的细胞凋亡信号转导途径
6.3 常用细胞凋亡的检测方法
6.3.1 细胞和亚细胞水平的形态学检测
6.3.2 DNA Ladder
6.3.3 TUNEL
6.3.4 Annexin V/PI
6.3.5 检测Caspases活性
6.4 细胞凋亡与RA
7 本研究的目的及意义
第二章 TCDCA与GR相互作用的研究
1 试验材料
1.1 药品与试剂
1.2 质粒与细胞
1.3 主要仪器设备
2 数据处理和统计分析
3 试验内容和方法
3.1 TCDCA与GR分子对接研究
3.1.1 准备受体文件
3.1.2 准备配体文件
3.1.3 准备Grid文件
3.1.4 分子对接
3.2 TCDCA对GR移位的观察
3.2.1 重组真核表达质粒pEGFP-C1-GR的构建
3.2.2 细胞转染
3.3 TCDCA对GR活化的影响
4 结果
4.1 TCDCA与GR的分子对接
4.2 TCDCA对GR核移位的影响
4.2.1 重组真核表达质粒pEGFP-C1-GR的构建
4.2.2 TCDCA对GR核移位的观察
4.3 TCDCA对GR活化的影响
5 讨论
6 小结
第三章 TCDCA对AP-1及ICAM-1表达与活性的影响
1 试验材料
1.1 药品与试剂
1.2 试验动物
1.3 主要仪器设备
2 数据处理和统计分析
3 试验内容和方法
3.1 细胞培养
3.1.1 AA大鼠模型的建立
3.1.2 滑膜组织的分离与采集
3.1.3 成纤维样滑膜细胞的分离培养
3.2 TCDCA对IL-1β刺激下AA大鼠FLS中AP-1蛋白表达的影响
3.2.1 分组与给药
3.2.2 细胞蛋白提取
3.2.3 蛋白定量
3.2.4 Western blot
3.3 TCDCA对IL-1β刺激下AA大鼠FLS中AP-1 DNA结合活性的影响
3.3.1 分组与给药
3.3.2 细胞核蛋白提取
3.3.3 蛋白定量
3.3.4 AP-1活性检测
3.4 TCDCA对IL-1β刺激下AA大鼠FLS中ICAM-1表达的影响
3.4.1 分组与给药
3.4.2 TCDCA对IL-1β刺激下AA大鼠FLS中ICAM-1 mRNA表达的影响
3.4.3 TCDCA对IL-1β刺激下AA大鼠FLS ICAM-1蛋白表达的影响
4 结果
4.1 AA大鼠模型的建立
4.2 AA大鼠FLS细胞的培养
4.3 蛋白浓度的测定
4.4 TCDCA对AP-1表达的影响
4.5 TCDCA对AP-1 DNA结合活性的影响
4.6 TCDCA对ICAM-1表达的影响
4.6.1 TCDCA对ICAM-1基因表达的影响
4.6.2 TCDCA对ICAM-1蛋白表达的影响
5 讨论
5.1 AA大鼠模型的建立及FLS细胞的分离培养
5.2 TCDCA对FLS细胞中AP-1的影响
5.3 TCDCA对FLS细胞中ICAM-1的影响
6 小结
第四章 TCDCA对AA大鼠FLS细胞凋亡的影响
1 试验材料
1.1 药品与试剂
1.2 试验动物
1.3 主要仪器设备
2 数据处理和统计分析
3 试验内容和方法
3.1 细胞培养
3.1.1 AA大鼠模型的建立
3.1.2 滑膜组织的分离、采集
3.1.3 成纤维样滑膜细胞的分离培养
3.2 TCDCA对FLS细胞凋亡的影响
3.2.1 分组与给药
3.2.2 TCDCA对FLS细胞凋亡率的影响
3.2.3 TCDCA对caspase-3、caspase-8 mRNA表达量的影响
3.2.4 TCDCA对Caspase-3、Caspase-8活性的影响
4 结果
4.1 TCDCA对FLS细胞凋亡率的影响
4.2 TCDCA对FLS细胞中caspase-3、caspase-8基因表达量的影响
4.2.1 总RNA的电泳检测
4.2.2 β-actin、caspase-3、caspase-8扩增效率曲线情况
4.2.3 β-actin、caspase-3、caspase-8基因qPCR扩增曲线和溶解曲线
4.2.4 PCR产物电泳检测及测序结果
4.2.5 序列测定
4.2.6 FLS 细胞中 caspase-3、caspase-<9基因的表达量
4.3 TCDCA对FLS细胞中Caspase-3、Caspase-8活性的影响
5 讨论
6 小结
全文讨论
全文结论
本课题主要创新之处
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参考文献
作者简介
本文编号：4057465
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/4057465.html
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