中国水仙NtPI2基因的克隆及遗传转化

发布时间：2025-05-12 03:55

　　 采用RT-PCR和RACE技术,从中国水仙‘金盏银台’中获得1个MADS-box基因NtPI2。NtPI2基因全长810bp,含有1个627bp开放阅读框,编码208个氨基酸。系统进化树显示,NtPI2属于B类MADS-box基因家族的PI/GLO类基因。荧光定量PCR分析表明,NtPI2基因在中国水仙‘金盏银台’各营养器官中都有表达;在单瓣和重瓣水仙花朵的各个部位均有表达,但表达模式存在差异。比较NtPI2在单瓣和重瓣中国水仙中的表达模式,发现重瓣水仙‘玉玲珑’的瓣化雄蕊和副冠的NtPI2基因表达量较单瓣水仙‘金盏银台’显著增高,推测NtPI2基因在瓣化雄蕊中表达量显著增高可能是重瓣中国水仙发生的直接原因。成功构建了NtPI2基因的pCAMBIA1302-NtPI2超表达载体,并通过农杆菌介导法进行烟草的遗传转化,分子鉴定结果表明共获得了8株转NtPI2基因植株。本研究为深入探索NtPI2基因的功能及其与中国水仙重瓣花形成的关系奠定了基础。

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【部分图文】：

图１ＮｔＰＩ２基因的克隆

定量ＰＣＲ分析。将基因在单瓣水仙花蕾中的表达量设定为１，结果表明（图４），ＮｔＰＩ２基因在‘金盏银台’的营养器官中有少量表达，在‘金盏银台’和‘玉玲珑’各个花器官中均有不同程度的表达。在单瓣水仙‘金盏银台’各器官中ＮｔＰＩ２表达量由高到低分别为：雌蕊＞副冠＞雄蕊＞花瓣，在‘玉玲珑....

图２ＮｔＰＩ２编码的氨基酸序列与其他物种ＰＩ／ＧＬＯ类ＭＡＤＳ－ｂｏｘ的比较

ＢＡＣ６６９６２．百子莲；ＡＣＤ８５０９２．白拉索兰；ＡＢＢ２２７７７．番红花；ＡＤＷ７６８６０．蕙兰；ＡＢＷ９６３９．石斛兰图２ＮｔＰＩ２编码的氨基酸序列与其他物种ＰＩ／ＧＬＯ类ＭＡＤＳ－ｂｏｘ的比较ＢＡＣ６６９６２．Ａｇａｐａｎｔｈｕｓｐｒａｅｃｏｘ；ＡＣＤ８５０９２．Ｂｒａ....

图３ＮｔＰＩ２及其他Ｂ类ＭＡＤＳ－ｂｏｘ转录因子的进化树分析

２ＮｔＰＩ２编码的氨基酸序列与其他物种ＰＩ／ＧＬＯ类ＭＡＤＳ－ｂｏｘ的比较ＢＡＣ６６９６２．Ａｇａｐａｎｔｈｕｓｐｒａｅｃｏｘ；ＡＣＤ８５０９２．Ｂｒａｓｓａｖｏｌａｎｏｄｏｓａ；ＡＢＢ２２７７７．Ｃｒｏｃｕｓｓａｔｉｖｕｓ；ＡＤＷ７６８６０．Ｃｙｍｂｉｄｉｕｍｆａｂｅｒｉ；ＡＢ....

图５ＮｔＰＩ２表达载体的ＰＣＲ鉴定

．Ｏｖａｒｙ）；ｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｎｏｒｍａｌｌｅｔｔｅｒｓｉｎｄｉｃａｔｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅａｔＰ＜０．０５．Ｆｉｇ．４ＮｔＰＩ２ｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｏｒｇａｎｓｏｆｆｌｏｗｅｒｆｒｏｍ‘Ｊｉｎｚｈａｎｙｉｎｔａｉ’（....

本文编号：4045103