水貂阿留申病毒VP2基因TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与应用

发布时间：2025-05-15 05:40

　　 目的建立一种方便、灵敏的水貂阿留申病毒（AMDV）荧光定量PCR检测方法,从而实现临床样品中AMDV的快速定量检测。方法根据AMDV的结构蛋白VP2的基因保守区域设计一对特异性引物和探针,优化PCR反应条件,建立TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,绘制标准曲线,并进行特异性、敏感性和稳定性分析。结果建立的标准曲线在1.0×10～2拷贝/μL至1.0×10～8拷贝/μL之间具有良好的线性关系,相关系数（r²）大于0.994。该方法检测的灵敏度为10～2拷贝/μL,且与犬细小病毒、犬腺病毒、犬瘟热病毒和水貂病毒性肠炎病毒均无明显交叉反应,特异性良好。重复性试验结果显示,该方法的组内和组间变异系数均小于3%,重复性良好。利用该方法对417份临床组织样品进行检测的结果显示,中国部分地区的AMDV阳性率为81.5%。结论本研究建立了一种重复性、特异性和敏感性良好的AMDV荧光定量PCR检测方法,可用于AMDV的临床检测和流行病学调查。

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 病毒与样品
        1.1.2 主要仪器和试剂
    1.2 方法
        1.2.1 引物设计与合成
        1.2.2质粒标准品的制备
        1.2.3 荧光定量PCR反应条件的优化
        1.2.4 荧光定量PCR标准曲线的建立
        1.2.5 敏感性试验
        1.2.6 特异性试验
        1.2.7 重复性试验
        1.2.8 临床样品检测
2 结果
    2.1 质粒标准品的制备
    2.2 荧光定量PCR反应条件的优化
    2.3 荧光定量PCR标准曲线
    2.4 荧光定量PCR检测的敏感性和特异性
    2.5 荧光定量PCR检测AMDV VP2基因重复性
    2.6 临床样品的检测验证
3 讨论



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