林麝源肺炎克雷伯氏菌GPKP基因kp05372缺失株的构建及其生物学特性分析

发布时间：2025-05-27 03:41

　　肺炎克雷伯氏菌是重要的条件致病菌,可导致林麝肺炎,从而引起死亡。肺炎克雷伯氏菌中的LysR型转录调控因子可参与调控其毒力、分解代谢、耐药性等。本研究通过构建林麝源肺炎克雷伯氏菌GPKP中新发现的LysR型转录调控基因的缺失株及回补株,比较三者的生长曲线、药敏试验、生物被膜、抗逆性、细菌半数致死量、定殖能力及其引起的器官病理形态学等生物学特性的差异,探究该转录调控因子的基本功能,主要试验结果如下:1.林麝源肺炎克雷伯氏菌基因kp05372缺失株及回补株的构建:扩增基因kp05372上下游同源臂,交叠PCR获得融合片段,以pLP12T质粒为载体,通过无缝克隆连接,成功构建重组自杀质粒。通过接合转移,在氯霉素压力正向筛选及阿拉伯糖诱导反向筛选下,经两次同源重组,最终成功筛选到缺失株GPKP-△kp05372。以质粒pBAD33为载体克隆连接敲除基因片段kp05372,成功构建回补表达质粒pBAD33-KP。通过接合转移,阿拉伯糖诱导调节基因表达量,成功筛选到回补株GPKP-△kp05372⁺。2.林麝源肺炎克雷伯氏菌生物学特性分析:三株菌生长速率无显著差异,均表现为2 h...

【文章页数】：83 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
缩略词表
第一部分 文献综述及研究目的和意义
    1 林麝的研究概况
        1.1 林麝的现状
        1.2 林麝常见疾病的研究现状
    2 肺炎克雷伯氏菌的生物学特征研究概况
        2.1 病原学
        2.2 流行病学
        2.3 耐药机制
        2.4 致病性
    3 LysR型转录因子研究进展
        3.1 LysR型转录因子的基本结构特征
        3.2 LysR蛋白转录调控模式
        3.3 LysR家族转录因子的主要功能
        3.4 肺炎克雷伯氏菌中的LysR家族转录因子
    4 肺炎克雷伯氏菌基因缺失技术概况
        4.1 λ Red重组技术
        4.2 自杀载体同源重组技术
        4.3 插入突变基因技术
    5 研究的目的与意义
第二部分 研究内容
    第一章 林麝源肺炎克雷伯氏菌GPKP基因KP05372 缺失株GPKP-△KP05372 及回补株GPKP-△KP05372+的构建
        1 试验材料
            1.1 主要菌株及质粒
            1.2 主要试剂
            1.3 主要仪器
        2 试验方法
            2.1 缺失株及回补株引物设计
            2.2 pLP12-KP自杀质粒的构建
            2.3 林麝GPKP-△kp05372 缺失株的构建
            2.4 pBAD33-KP回补表达质粒构建
            2.5 林麝GPKP-△kp05372+回补株的构建
        3 试验结果
            3.1 pLP12-KP自杀质粒的构建
            3.2 林麝GPKP-△kp05372 缺失株的构建
            3.3 pBAD33-KP回补表达质粒构建
            3.4 林麝GPKP-△kp05372⁺回补株的构建
        4 讨论
    第二章 林麝源肺炎克雷伯氏菌基因缺失株、回补株及野生株生物学特性对比研究.
        1 试验材料
            1.1 主要菌株及试验动物
            1.2 主要试剂
            1.3 主要仪器
        2 试验方法
            2.1 生长曲线测定
            2.2 药敏试验
            2.3 生物被膜检测
            2.4 抗逆性的检测
            2.5 细菌半数致死量LD₅₀ 检测
            2.6 细菌定殖能力检测
            2.7 组织病理学观察试验
        3 试验结果
            3.1 生长曲线测定
            3.2 药敏试验
            3.3 生物被膜检测
            3.4 抗逆性的检测
            3.5 细菌半数致死量LD₅₀ 检测
            3.6 细菌定殖能力检测
            3.7 组织病理学观察
        4 讨论
            4.1 生长速率
            4.2 生物被膜
            4.3 药敏试验
            4.4 抗逆性
            4.5 细菌半数致死量 LD50

            4.6 细菌定殖能力
            4.7 组织病理学观察
第三部分 结论
参考文献
致谢
附录
作者简历



本文编号：4047453

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