甲基营养菌MB200中mutL基因的突变及高耐甲醇菌株的筛选

发布时间：2025-05-28 22:11

　　 甲基营养菌M.sp.MB200是本实验室保存的一株可以利用甲醇为碳源的甲基营养菌,具有利用甲醇作为底物生产L-丝氨酸的能力。提高其耐底物浓度的能力,有利于L-丝氨酸的转化。以M.sp.MB200野生菌株作为出发菌株,通过三亲本结合进行同源单交换构建突变修复基因mutL插入突变菌株MB200mTB,该突变株无法修复菌体在繁殖传代过程中产生的各种随机突变,以甲醇为碳源进行环境压力筛选,具有甲醇耐受突变的菌株可以在甲醇浓度不断升高的环境中生长,而其余突变方向菌株在高甲醇环境下不能生长,进而筛选出甲醇耐受方向的突变株。对耐高浓度甲醇的菌株使用三亲本结合回补mut L基因,得到了7株可以在甲醇浓度为7%的基础培养基中生长性状优异的突变株。在含7%甲醇的基础培养基中,MB200mHB1号突变株较出发菌株M.sp.MB200甲醇耐受性提升近4倍,菌体生长量增加2.2倍。

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌种与质粒
        1.1.2 培养基
        1.1.3 常用抗生素及使用浓度
        1.1.4 主要试剂
    1.2 方法
        1.2.1 M.sp.MB200和突变菌株
        1.2.2 mutL基因和部分mutL片段(mutLps)的PCR扩增和DNA测序
        1.2.3 原始菌株M.sp MB200的耐甲醇性
        1.2.4 Mut L基因突变株MB200mTB的构建
        1.2.5 突变株MB200mTB的耐甲醇诱导
        1.2.6 表达载体pCM80-mutL的构建
        1.2.7 耐高甲醇浓度重组株MB200mHB菌株构建
        1.2.8 重组菌株遗传稳定性研究
        1.2.9 重组菌株生长情况分析
2 结果与讨论
    2.1 菌株M.sp MB200的甲醇耐受
    2.2 突变体的构建与筛选
    2.3 菌株MB200mTB的甲醇诱导突变
    2.4 重组菌株MB200mTB的构建
    2.5 重组株MB200mHB遗传性状稳定性
    2.6 野生菌与重组菌生长情况分析
3 结论



本文编号：4048284