低温胁迫下香梨优斑螟内参筛选及HSP70、HSP90基因表达分析

发布时间：2025-06-29 19:19

　　 【目的】为筛选出香梨优斑螟(Euzophera pyriella)在低温胁迫下合适的内参基因,并明确低温胁迫对热激蛋白基因表达的影响。【方法】从梨园采集香梨优斑螟5龄幼虫,于4℃处理0、0.25、1、3、8、12、18、24 h,以实时荧光定量技术测定内参基因及热激蛋白基因的表达丰度,利用ΔCt法、GeNorm、NormFinder、BestKeeper和RefFinder软件综合评价5个内参基因的稳定性,进一步分析低温处理后热激蛋白(HSP70和HSP90)基因表达规律。【结果】△Ct和Normfinder方法的内参基因稳定性为UBQ>GAPDH>Actin>18s>TUB,BestKeeper方法中18s和UBQ基因表现最为稳定,GeNorm认为Actin和GAPDH稳定性好,其次是UBQ,RefFinder综合评价稳定性UBQ最高,其次为GAPDH,而稳定性最差的是TUB。以UBQ为内参基因,发现热激蛋白家族中HSP70和HSP90基因相对表达量都是在1 h处理时达到峰值、然后下降,在18 h后有小幅度上升,维持在较高的水平,总体上表达呈现显著的先上升后下...

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【部分图文】：

图1 内参基因Ct值变化趋势

Ct法计算结果UBQ分值最小,其次为GAPDH,TUB基因的分值最高、稳定性最差(图2-A)。NormFinder软件分析的稳定性为UBQ>GAPDH>Actin>18s>TUB(图2-B)。GeNorm以参数M=1.5为阈值来判断基因的稳定性,小于1.5时表明该基因稳定性良好,....

图4 HSP90基因的相对表达量

HSP70基因经过低温胁迫处理后,其相对表达量分别是对照组的5.08、8.79、2.52、4.09、1.50、6.50、3.76倍,并于1h处理时达到峰值,HSP70基因相对表达量明显高于对照,初期及24h末期显著高于对照(图3)。HSP90基因分别是对照组的4.01、12.....

图2 内参基因表达稳定性

表3BestKeeper软件分析内参基因稳定性Table3ExpressionstabilityofreferencegenesbyBestKeeper基因Gene几何平均值Geomean算数平均值ArMean最小值Min最大值Max标准差S....

图3 HSP70基因的相对表达量

2.4低温处理下HSP70和HSP90基因表达特征HSP70基因经过低温胁迫处理后,其相对表达量分别是对照组的5.08、8.79、2.52、4.09、1.50、6.50、3.76倍,并于1h处理时达到峰值,HSP70基因相对表达量明显高于对照,初期及24h末期显著高于对照(....

本文编号：4054708