人工肽适体抑制香蕉枯萎病尖孢镰刀菌的研究

发布时间：2025-07-07 06:35

　　香蕉枯萎病是困扰热带香蕉行业多年的难题。香蕉枯萎病的致病菌是真菌尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum f.sp.cubense,FOC),其能侵染香蕉根部从而引起的维管束病害,导致维管束木质化。由于尖孢镰刀菌是通过土壤传播,难以防治,对香蕉产业造成了毁灭性危害。香蕉枯萎病一直是热带作物病害的研究热点,目前已有越来越多的高新技术被应用于香蕉枯萎病防治。人工肽适体(peptide aptamer或pepaptamers)是一种筛选自人工合成的随机氨基酸文库,可高特异性、高亲和力结合靶标蛋白质的短肽,可用于研发具有潜在应用价值的生物抗菌剂。将人工肽适体应用于香蕉枯萎病防治,是香蕉产业病害防控研究的新突破。本研究基于高容量肽适体文库,在作用靶标未知的情况下对尖孢镰刀菌孢子进行抑菌实验,筛选出能够特异性抑制尖孢镰刀菌,且对香蕉植株无害、环境友好型的肽适体,并研究其作用机制。主要研究结果如下:(1)通过抑菌实验初步筛选出对尖孢镰刀菌有抑制作用的肽适体SNP-D4,测序结果显示其全长576 bp,编码191个氨基酸,整体蛋白分子量大小为21 kDa。(2)构建SNP-D4与支架蛋白SN的原...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２肽适体单克隆ＰＣＲ结果??注：Ｍ为Ｍａｒｋｅｒ，１－３２为不同的肽适体单克隆

３．?１．?１?肽适体文库的转化与ＰＣＲ验证??通过文库质粒转化，从肽适体文库中分离鉴定得到３２个肽适体单克隆，ＰＣＲ??验证结果见图２。如图所示，３２个肽适体单克隆均能被特异性引物扩增，得到明??亮单一的条带，其实际片段大小在７５０ｂｐ左右，与预期大小一致，表明转化文库??质粒....

图３?ＳＮＰ－Ｄ４抑制ＦＯＣ４孢子萌发??注：红色圆圈标记的为未萌发的孢子，红色箭头标记的为萌发受到抑制的孢子

?３．１．２?抑菌实验筛选肽适体结果??抑菌实验结果如图３，在３２个肽适体单克隆中，发现５种肽适体对尖孢镰刀??菌孢子具有抑制作用，其中ＳＮＰ－Ｄ４效果最佳。从图３中可以看出，在相同处理??时间下，ＰＢＳ?（磷酸盐缓冲液）处理组与转入ｐＴＲＧ－ＳＮ载体的ｒｅｐｏｒｔｅｒ菌株的细?....

图４?ＳＮＰ－Ｄ４的核苷酸与氨基酸序列??注：红色边框标记部分为可变肽段?

为了确定具有孢子萌发抑制活性的ＳＮＰ－Ｄ４的序列信息，提取表达ＳＮＰ－Ｄ４??的质粒并测序，得到ＳＮＰ－Ｄ４全长５７６?ｂｐ，编码１９１个氨基酸，整体蛋白分子量??大小为２１?ｋＤａ?（图４）。其编码的可变肽段序列为共１６个氨基酸，序列为ＶＴＦＬ??ＶＮＴＹＰＮＧ?ＶＯＳＲ?Ａ?....

图９透析后的ＳＮ和ＳＮＰ－Ｄ４蛋白电泳??注：Ｍ?为?Ｍａｒｋｅｒ，?１、２?为?ＳＮ?蛋白，３、４?为?ＳＮＰ－Ｄ４?蛋白

??将纯化之后的蛋白进行透析，结果如图９，成功得到了条带清晰、几乎没有??杂蛋白的ＳＮ和ＳＮＰ－Ｄ４蛋白。??ｋＤａ?Ｍ?１?２?３?４??１１６．０??：：：〇??３５．０??２５０?－??、■?？二！ｒＤ４??１８－４??１?．??图９透析后的ＳＮ和ＳＮＰ－Ｄ４蛋白电泳??注....

本文编号：4056655