橡胶树白粉菌分子检测技术的建立及初步评价

发布时间：2024-11-28 22:46

　　橡胶树白粉病在我国各主要植胶区均有发生,对橡胶树的生长和天然橡胶产量造成严重损失。Oidium heveae B.A.Steinmn是引起橡胶树白粉病的一类专性寄生菌。目前,对橡胶树白粉菌的检测鉴定主要是依据其症状、形态、生理生化反应,分子检测技术报道甚少。本研究建立了关于橡胶树白粉菌PCR、nested-PCR、LAMP分子检测技术,并对其检测效果做了初步评价,目的在于能够检测叶片组织中处于潜育期的橡胶树白粉病菌,为该病害的早期诊断、防治方案的制定以及预测预报模型的搭建提供科学依据。具体结果如下:在ITS序列上设计了数对橡胶树白粉菌引物,经筛选验证特异性均不强。在橡胶树白粉病菌全基因组测序的基础上,经比对分析找到一条橡胶树白粉菌特异性保守序列(专利申请号:201510577343.9),根据该条特异序列,设计特异性引物,对不同检测方法的反应体系均做了优化试验。PCR的最适退火温度为57℃;nested-PCR的最适退火温度也为57℃;LAMP的最适退火温度为63℃,最适反应时间为50min。并且尝试使用PCR来筛选LAMP的最适引物,也将引物的纯化方式从HPLC降低到PAGE,引物纯度...

【文章页数】：77 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１４凝胶电泳检测不同溫度对ＬＡＭＰ反应体系的影响??

同的温度梯度，分别放置于不同温度的水浴锅中进行扩增反应，反应结束后，采??用两种检测方法检测。??凝胶电泳检测，结果表明（图１４）：当温度设置为６ＰＣ时有非常微弱的梯状??条带出现，随着温度逐渐升高，条带的的亮度也越来越亮，当温度达到６３°Ｃ时，??出现的条带最亮，随后再升高温度....

图１７?ＳＹＢＲ?Ｇｒｅｅｎ?Ｉ检测不同时间对ＬＡＭＰ反应体系的影响??

??紫外荧光检测，结果表明（图１７）?：３？７号ＰＣＲ管的绿色荧光亮度逐渐増强，??６号管与７号管亮度相同均达到最强，说明反应时间为５０?ｍｉｎ、６０?ｍｉｎ时，反应??体系均达到最佳反应状态

图２７橡胶树叶片在白粉菌不同接种量下使用常规ＰＣＲ、ｎｅｄｔｅｄ?ＰＣＲ及ＬＡＭＰ在接种后不??同天数时测得的平均检出率的比较??Ｆｉｇ．２７?Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ?ｉｎ?ａｖｅｒａｇｅ?ｄｅｔ?

图２７橡胶树叶片在白粉菌不同接种量下使用常规ＰＣＲ、ｎｅｄｔｅｄ?ＰＣＲ及ＬＡＭＰ在接种后不??同天数时测得的平均检出率的比较??

图２８不同接种量与病情指数之间的关系??

图２８不同接种量与病情指数之间的关系??Ｆｉｇ．?２８?Ｔｈｅ?ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ?ｂｅｔｗｅｅｎ?ａｍｏｕｎｔ?ｏｆ?ｉｎｏｃｕｌｕｍ?ａｎｄ?ｄｉｓｅａｓｅ?ｉｎｄｅｘ??３．?６便携式孢子捕捉器玻片上ＤＮＡ的提取??

本文编号：4012883