烟草甲4个clip丝氨酸蛋白酶基因的鉴定及生理功能分析

发布时间：2025-07-18 21:05

　　作为激活胞外级联通路的重要组成部分,clip丝氨酸蛋白酶基因（clip-domain serine proteases,CLIPs）在昆虫变态发育和免疫生理过程中发挥着重要作用。本研究以重要仓储害虫烟草甲Lasioderma serricorne为研究对象,基于烟草甲转录组数据库克隆4个CLIPs基因（LsCLIP1、LsCLIP2、LsCLIP3和LsCLIP4）,探讨其在烟草甲幼虫化蛹、先天免疫中的功能,对筛选有效的靶标来防治烟草甲具有重要意义。1.烟草甲LsCLIPs基因的克隆及序列分析利用RT-PCR技术克隆了烟草甲4个LsCLIPs基因,包括LsCLIP1、LsCLIP2、LsCLIP3和LsCLIP4的开放阅读框（open reading frames,ORFs）,其ORFs长度分别是1194 bp,1194 bp,1173 bp和1158 bp,分别编码397,397,390和385个氨基酸,相对分子质量分别为44.3,43.4,43.0和42.3 kDa,等电点分别是6.18,5.19,5.85和6.10。通过SMART在线软件分析表明,4个LsCLIPs基因编码的氨基酸...

【文章页数】：77 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第一章 文献综述
    1.1 烟草甲的危害及控制
    1.2 昆虫的先天免疫
    1.3 丝氨酸蛋白酶的研究进展
    1.4 clip丝氨酸蛋白酶
        1.4.1 clip丝氨酸蛋白酶的结构
        1.4.2 clip丝氨酸蛋白酶的分类
        1.4.3 clip丝氨酸蛋白酶的生理功能
    1.5 立题依据
第二章 烟草甲LsCLIPs基因的克隆及序列分析
    2.1 材料与方法
        2.1.1 供试昆虫
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 实验仪器
        2.1.4 主要溶液的配制
        2.1.5 生物信息学分析工具
        2.1.6 烟草甲总RNA的提取
        2.1.7 反转录合成第一链cDNA
        2.1.8 胶回收
        2.1.9 连接
        2.1.10 转化
        2.1.11 阳性克隆的鉴定
    2.2 结果与分析
    2.3 讨论
第三章 烟草甲LsCLIPs基因的时空表达与20E调控模式
    3.1 材料与方法
        3.1.1 供试昆虫
        3.1.2 20E处理
        3.1.3 主要试剂
        3.1.4 反转录合成第一链cDNA
        3.1.5 引物设计
        3.1.6 荧光定量PCR
    3.2 结果与分析
        3.2.1 LsCLIPs不同发育阶段表达模式
        3.2.2 LsCLIPs不同组织部位表达模式
        3.2.3 20E处理
    3.3 讨论
第四章 象虫金小蜂寄生和肽聚糖胁迫对烟草甲LsCLIPs基因的影响
    4.1 材料与方法
        4.1.1 供试昆虫及材料
        4.1.2 象虫金小蜂寄生方法
        4.1.3 肽聚糖胁迫试验方法
        4.1.4 主要试剂
        4.1.5 反转录合成第一链cDNA
        4.1.6 引物设计
        4.1.7 荧光定量PCR
    4.2 结果与分析
        4.2.1 象虫金小蜂寄生对烟草甲LsCLIPs基因表达的影响
        4.2.2 肽聚糖胁迫对烟草甲LsCLIPs基因表达的影响
    4.3 讨论
第五章 烟草甲LsCLIPs基因的生理功能分析
    5.1 材料与方法
        5.1.1 供试昆虫
        5.1.2 实验试剂
        5.1.3 引物设计
        5.1.4 dsRNA合成方法
        5.1.5 LsCLIPs沉默后烟草甲对大肠杆菌的敏感性
        5.1.6 反转录合成第一链cDNA
        5.1.7 荧光定量PCR
    5.2 结果与分析
        5.2.1 LsCLIP1 干扰对烟草甲化蛹的影响
        5.2.2 LsCLIP2 干扰对烟草甲化蛹的影响
        5.2.3 LsCLIP3 干扰对烟草甲化蛹的影响
        5.2.4 LsCLIP4 干扰对烟草甲化蛹的影响
        5.2.5 基于RNAi的 LsCLIPs基因先天免疫功能分析
    5.3 讨论
第六章 总结与展望
    6.1 主要研究结果
        6.1.1 烟草甲LsCLIPs基因的克隆及序列分析
        6.1.2 烟草甲LsCLIPs基因的时空表达和20E调控模式
        6.1.3 象虫金小蜂寄生和肽聚糖胁迫对烟草甲LsCLIPs基因表达的影响
        6.1.4 烟草甲LsCLIPs的生理功能研究
    6.2 论文的创新点
    6.3 论文的不足及展望
致谢
参考文献
附录



本文编号：4057422