哈维氏弧菌GST、GPx疫苗制备及其对斜带石斑鱼的免疫保护作用

发布时间：2025-08-12 21:56

　　哈维氏弧菌是一种栖息在水生和海洋环境的革兰氏阴性细菌，影响许多水产养殖动物。它是甲壳类动物和诱导养殖对虾发光弧菌病的病原体，它也是一种鱼类病原菌，感染多种物种，给海水养殖业带来严重的经济损失。目前，水产养殖控制弧菌病主要是依赖抗生素，但由此带来的各种副作用如细菌耐药性，环境污染相关联以及食品安全危害日益明显。近几年，人们转向了从基因工程方向来防治弧菌病。 生物体在代谢过程中会产生少量的自由基，体内的抗氧化系统（抗氧化剂和酶类）能及时清除从而维持自由基代谢平衡。在生物体内，常规生理浓度的活性氧（ROS）是维持正常细胞生理功能所需的，而过量的ROS则会对生物分子造成伤害。超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽还原酶（GR）、谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）和谷胱甘肽硫转移酶（GST）等组成了体内微型抗氧化系统，在维持生物体内活性氧（ROS）的平衡具有非常重要的作用，能有效保护细胞免受氧化损伤。 本研究通过同源引物从哈维氏弧菌ZJ0603基因组扩增得GST和GPx基因ORF，将两个基因分别克隆pMD-18T载体测序，并进行生物信息学分析。GST基因ORF全长615bp，编码204个氨基酸组成的...

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
英文缩略词
1 前言
    1.1 斜带石斑鱼
    1.2 哈维氏弧菌研究进展
        1.2.1 哈维氏弧菌生物学特性
        1.2.2 哈维氏弧菌的致病性与致病机理
        1.2.3 哈维氏弧菌病的防治
    1.3 抗氧化系统与活性氧（ROS）
    1.4 谷胱甘肽系统
        1.4.1 谷胱甘肽及其生理功能
        1.4.2 谷胱甘肽硫转移酶（GST）
        1.4.3 谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）
    1.5 研究目的及意义
2 GST、GPX 基因的克隆、表达及条件优化
    2.1 材料
        2.1.1 菌株和质粒
        2.1.2 培养基和主要溶液
        2.1.3 主要仪器
        2.1.4 主要试剂、试剂盒
    2.2 方法
        2.2.1 GST 基因克隆
        2.2.2 GPx 基因克隆
        2.2.3 GST 基因的原核表达
        2.2.4 GPx 基因的原核表达
    2.3 结果
        2.3.1 GST 基因 ORF 扩增
        2.3.2 GST 基因原核表达结果
        2.3.3 GPx 基因 ORF 扩增
        2.3.4 GPx 基因原核表达结果
    2.4 讨论
3 GST、GPX 基因亚单位疫苗对斜带石斑鱼的免疫保护性研究
    3.1 材料
        3.1.1 菌株
        3.1.2 实验用鱼
        3.1.3 实验仪器及试剂
    3.2 方法
        3.2.1 抗原和攻毒菌株
        3.2.2 重组蛋白对斜带石斑鱼的毒性实验
        3.2.3 亚单位疫苗对斜带石斑鱼的免疫及攻毒
        3.2.4 ELISA 检测抗体效价
    3.3 结果
        3.3.1 重组蛋白对斜带石斑鱼的毒性实验
        3.3.2 抗体效价
        3.3.3 免疫保护率
    3.4 讨论
4 GST、GPX 核酸疫苗对斜带石斑鱼的免疫保护性研究
    4.1 实验材料
        4.1.1 菌株
        4.1.2 实验用鱼
        4.1.3 实验仪器及试剂
    4.2 实验方法
        4.2.1 核酸疫苗的制备
        4.2.2 攻毒菌株
        4.2.3 重组质粒对斜带石斑鱼的毒性实验
        4.2.4 核酸疫苗对斜带石斑鱼的免疫及攻毒
        4.2.5 DNA 水平检测真核质粒转染
        4.2.6 mRNA 水平检测真核质粒转染
        4.2.7 ELISA 检测抗体效价
        4.2.8 Western-blot 检测基因在斜带石斑鱼体内表达
    4.3 实验结果
        4.3.1 GST 基因真核表达质粒的构建及鉴定
        4.3.2 GPx 基因真核表达质粒的构建和鉴定
        4.3.3 重组真核质粒对斜带石斑鱼的毒性实验
        4.3.4 抗体效价检测
        4.3.5 免疫保护率
        4.3.6 DNA 水平检测真核质粒转染
        4.3.7 mRNA 水平检测真核质粒转染
        4.3.8 Western-blot 检测
    4.4 讨论
5 总结
参考文献
致谢
作者简介
导师简介



本文编号：4059191