北陵鸢尾ItDREB2基因的遗传转化及功能分析
发布时间：2021-09-18 15:21
本文以北陵鸢尾ItDREB2基因为研究对象,以pBI121-It DREB为载体,分别对烟草和拟南芥进行遗传转化,并对转基因烟草和拟南芥在干旱、高盐胁迫下叶绿素含量、SOD活性、POD活性等生理指标进行测定;以pBI121-ItDREB-GFP为载体转化拟南芥,进行亚细胞定位;利用实时荧光定量RT-PCR技术分析转基因烟草下游基因调控表达;对转基因烟草形态学变化和生长发育状况进行观测。研究结果如下:1.根癌农杆菌介导,分别获得具有抗卡那霉素的转基因烟草和拟南芥抗性植株,经PCR和Northern杂交鉴定外源ItDREB2基因被整合到烟草和拟南芥的基因组中并成功表达。2.选取转ItDREB2基因的烟草和拟南芥抗性植株进行干旱、高盐胁迫处理,测定出转ItDREB2基因烟草和拟南芥植物体内叶绿素含量、SOD活性、POD活性都比非转基因烟草和拟南芥高,转基因烟草和拟南芥抗干旱、高盐能力得到了提高。3.利用实时荧光定量RT-PCR技术分析在干旱和高盐胁迫处理下ItDREB2基因相关下游基因的调控表达,结果显示,在非逆境下,多数候选基因表达量上调,在经过盐胁迫处理后Lea5、ERD10B、P5CS...
【文章来源】：东北林业大学黑龙江省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：51 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
转ItDREB2基因烟草Fig.2-1TransgenictobaccowithItDREB2gene通过根癌农杆菌介导转化烟草，筛选出具有抗卡那霉素的抗性芽（如图2-1A），然
图 2-1 转 ItDREB2 基因烟草Fig.2-1Transgenic tobacco with ItDREB2 gene农杆菌介导转化烟草，筛选出具有抗卡那霉素的抗性芽（如图续培养生根（如图 2-1B），将生根的无菌苗移栽在培养土中培养（（如图 2-1B），最终得到转基因烟草 42 株。REB2 基因烟草的鉴定DREB2 基因烟草 PCR 鉴定所示。在这几个转基因株系和阳性对照中，在 795bp 处都有扩这说明外源基因已转到了烟草中。
进行比较如图2-4 显示：图 2-4A 为 200mmol/LNaCl 处理 0d 时，转基因烟草各株系生长良好，底叶无白化；图 2-4B 是处理 15d 时，此时转基因各株系和非转基因烟草苗底叶开始白化，且白化程度 WT＞L9＞L8＞L1；图 2-4C 为处理 30d 时，野生型烟草 WT 底叶完全白化，而转基因各株系白化程度较轻；因此可以看出转基因烟草的耐盐性较野生型烟草有了明显提高。图 2-4 转 ItDREB2 基因烟草耐盐性盆栽比较Fig.2-4Comparison of salt tolerance of transgenic tobacco with ItDREB2 gene2.3.3.2 转 ItDREB2 基因烟草抗旱性盆栽比较自然干旱处理转基因烟草和非转基因烟草幼苗，进行比较如图 2-5 显示：图 2-5A为自然干旱处理 0d 时，转基因烟草各株系生长良好，底叶生长正常；图 2-4B 是处理 7d时，此时转基因各株系和非转基因烟草苗底叶开始变黄，且变黄程度 WT＞L9＞L1＞L8；图 2-5C 为处理 15d 时
【参考文献】：
期刊论文
[1]干旱胁迫对杨树品种2025及其2个芽变品种叶片光合生理特征的影响[J]. 张江涛,晏增,杨淑红,马永涛,朱镝. 中南林业科技大学学报. 2017(03)
[2]干旱胁迫对宫粉羊蹄甲生理指标的影响[J]. 唐洪辉,魏丹,赵庆,胡柔璇. 中南林业科技大学学报. 2017(04)
[3]准噶尔无叶豆EsDREB2B基因在烟草中的抗逆功能分析[J]. 李士敏,李小双,杨红兰,张道远. 分子植物育种. 2016(02)
[4]外源NO调控盐胁迫下蒺藜苜蓿种子萌发生理特性及抗氧化酶的研究[J]. 刘文瑜,杨宏伟,魏小红,刘博,王高强,吴伟涛. 草业学报. 2015(02)
[5]Improved salt tolerance of Populus davidiana × P. bolleana overexpressed LEA from Tamarix androssowii[J]. Yanshuang Sun,Su Chen,Haijiao Huang,Jing Jiang,Shuang Bai,Guifeng Liu. Journal of Forestry Research. 2014(04)
[6]ABA缓解水稻孕穗期干旱胁迫生理特性的分析[J]. 郭贵华,刘海艳,李刚华,刘明,李岩,王绍华,刘正辉,唐设,丁艳锋. 中国农业科学. 2014(22)
[7]盐胁迫下豌豆幼苗对内外源NO的生理生化响应[J]. 时振振,李胜,杨柯,马绍英,刘会杰,张品南,杨晓明. 草业学报. 2014(05)
[8]非生物逆境相关基因在棉花抗逆研究中的进展[J]. 雷志,周美亮,吴燕民. 中国农业科技导报. 2014(02)
[9]土壤干旱胁迫对沙棘叶片光合作用和抗氧化酶活性的影响[J]. 裴斌,张光灿,张淑勇,吴芹,徐志强,徐萍. 生态学报. 2013(05)
[10]干旱胁迫下4种委陵菜属植物叶片的超微结构[J]. 吴建慧,崔艳桃,赵倩竹. 草业科学. 2012(11)
博士论文
[1]转AtDREBlA基因草地早熟禾适应干旱及旱后复水的生理生化响应[D]. 李飞飞.北京林业大学 2015
[2]拟南芥chyB和DREB2A基因对转基因烟草抗逆的研究[D]. 赵清.天津大学 2013
[3]盐碱胁迫下水稻OsAPX家族基因表达特性差异研究[D]. 管清杰.东北林业大学 2007
[4]大豆DREB类转录因子基因的克隆及功能研究[D]. 李雪平.中国农业大学 2004
[5]水稻DREB转录因子基因的克隆及相关研究[D]. 田秀红.中国农业大学 2004
硕士论文
[1]转LbDREB基因大青杨抗旱及耐盐性分析[D]. 李墨野.东北林业大学 2016
[2]北陵鸢尾（Iris typhifolia Kitag.）DREB转录因子的克隆及其对烟草的遗传转化[D]. 李雪.东北林业大学 2015
[3]花生干旱胁迫响应转录因子DREB1基因的转化研究[D]. 翟迎慧.山东农业大学 2015
[4]大豆DREB/CBF转录因子GmDREB1A的克隆及功能鉴定[D]. 李艳杰.吉林大学 2014
[5]玉米DREB1/CBF转录因子的克隆及其抗逆功能分析[D]. 周伟.吉林大学 2013
[6]冰凌花转录因子AaDREB1基因的表达分析及功能鉴定[D]. 宗俊梅.吉林农业大学 2011
[7]花生中DREB、bZIP类转录因子耐逆性研究[D]. 黄聪.哈尔滨师范大学 2010
[8]番茄LeDREB1转录因子基因在转基因拟南芥中的功能分析[D]. 王迎波.中国农业科学院 2010
[9]小麦DREB类转录因子基因的表达与抗逆功能分析[D]. 郑甲成.西北农林科技大学 2010
[10]大豆转录因子GmDREB的功能分析[D]. 王晓飞.中国农业科学院 2008
本文编号：3400374
【文章来源】：东北林业大学黑龙江省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：51 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
转ItDREB2基因烟草Fig.2-1TransgenictobaccowithItDREB2gene通过根癌农杆菌介导转化烟草，筛选出具有抗卡那霉素的抗性芽（如图2-1A），然
图 2-1 转 ItDREB2 基因烟草Fig.2-1Transgenic tobacco with ItDREB2 gene农杆菌介导转化烟草，筛选出具有抗卡那霉素的抗性芽（如图续培养生根（如图 2-1B），将生根的无菌苗移栽在培养土中培养（（如图 2-1B），最终得到转基因烟草 42 株。REB2 基因烟草的鉴定DREB2 基因烟草 PCR 鉴定所示。在这几个转基因株系和阳性对照中，在 795bp 处都有扩这说明外源基因已转到了烟草中。
进行比较如图2-4 显示：图 2-4A 为 200mmol/LNaCl 处理 0d 时，转基因烟草各株系生长良好，底叶无白化；图 2-4B 是处理 15d 时，此时转基因各株系和非转基因烟草苗底叶开始白化，且白化程度 WT＞L9＞L8＞L1；图 2-4C 为处理 30d 时，野生型烟草 WT 底叶完全白化，而转基因各株系白化程度较轻；因此可以看出转基因烟草的耐盐性较野生型烟草有了明显提高。图 2-4 转 ItDREB2 基因烟草耐盐性盆栽比较Fig.2-4Comparison of salt tolerance of transgenic tobacco with ItDREB2 gene2.3.3.2 转 ItDREB2 基因烟草抗旱性盆栽比较自然干旱处理转基因烟草和非转基因烟草幼苗，进行比较如图 2-5 显示：图 2-5A为自然干旱处理 0d 时，转基因烟草各株系生长良好，底叶生长正常；图 2-4B 是处理 7d时，此时转基因各株系和非转基因烟草苗底叶开始变黄，且变黄程度 WT＞L9＞L1＞L8；图 2-5C 为处理 15d 时
【参考文献】：
期刊论文
[1]干旱胁迫对杨树品种2025及其2个芽变品种叶片光合生理特征的影响[J]. 张江涛,晏增,杨淑红,马永涛,朱镝. 中南林业科技大学学报. 2017(03)
[2]干旱胁迫对宫粉羊蹄甲生理指标的影响[J]. 唐洪辉,魏丹,赵庆,胡柔璇. 中南林业科技大学学报. 2017(04)
[3]准噶尔无叶豆EsDREB2B基因在烟草中的抗逆功能分析[J]. 李士敏,李小双,杨红兰,张道远. 分子植物育种. 2016(02)
[4]外源NO调控盐胁迫下蒺藜苜蓿种子萌发生理特性及抗氧化酶的研究[J]. 刘文瑜,杨宏伟,魏小红,刘博,王高强,吴伟涛. 草业学报. 2015(02)
[5]Improved salt tolerance of Populus davidiana × P. bolleana overexpressed LEA from Tamarix androssowii[J]. Yanshuang Sun,Su Chen,Haijiao Huang,Jing Jiang,Shuang Bai,Guifeng Liu. Journal of Forestry Research. 2014(04)
[6]ABA缓解水稻孕穗期干旱胁迫生理特性的分析[J]. 郭贵华,刘海艳,李刚华,刘明,李岩,王绍华,刘正辉,唐设,丁艳锋. 中国农业科学. 2014(22)
[7]盐胁迫下豌豆幼苗对内外源NO的生理生化响应[J]. 时振振,李胜,杨柯,马绍英,刘会杰,张品南,杨晓明. 草业学报. 2014(05)
[8]非生物逆境相关基因在棉花抗逆研究中的进展[J]. 雷志,周美亮,吴燕民. 中国农业科技导报. 2014(02)
[9]土壤干旱胁迫对沙棘叶片光合作用和抗氧化酶活性的影响[J]. 裴斌,张光灿,张淑勇,吴芹,徐志强,徐萍. 生态学报. 2013(05)
[10]干旱胁迫下4种委陵菜属植物叶片的超微结构[J]. 吴建慧,崔艳桃,赵倩竹. 草业科学. 2012(11)
博士论文
[1]转AtDREBlA基因草地早熟禾适应干旱及旱后复水的生理生化响应[D]. 李飞飞.北京林业大学 2015
[2]拟南芥chyB和DREB2A基因对转基因烟草抗逆的研究[D]. 赵清.天津大学 2013
[3]盐碱胁迫下水稻OsAPX家族基因表达特性差异研究[D]. 管清杰.东北林业大学 2007
[4]大豆DREB类转录因子基因的克隆及功能研究[D]. 李雪平.中国农业大学 2004
[5]水稻DREB转录因子基因的克隆及相关研究[D]. 田秀红.中国农业大学 2004
硕士论文
[1]转LbDREB基因大青杨抗旱及耐盐性分析[D]. 李墨野.东北林业大学 2016
[2]北陵鸢尾（Iris typhifolia Kitag.）DREB转录因子的克隆及其对烟草的遗传转化[D]. 李雪.东北林业大学 2015
[3]花生干旱胁迫响应转录因子DREB1基因的转化研究[D]. 翟迎慧.山东农业大学 2015
[4]大豆DREB/CBF转录因子GmDREB1A的克隆及功能鉴定[D]. 李艳杰.吉林大学 2014
[5]玉米DREB1/CBF转录因子的克隆及其抗逆功能分析[D]. 周伟.吉林大学 2013
[6]冰凌花转录因子AaDREB1基因的表达分析及功能鉴定[D]. 宗俊梅.吉林农业大学 2011
[7]花生中DREB、bZIP类转录因子耐逆性研究[D]. 黄聪.哈尔滨师范大学 2010
[8]番茄LeDREB1转录因子基因在转基因拟南芥中的功能分析[D]. 王迎波.中国农业科学院 2010
[9]小麦DREB类转录因子基因的表达与抗逆功能分析[D]. 郑甲成.西北农林科技大学 2010
[10]大豆转录因子GmDREB的功能分析[D]. 王晓飞.中国农业科学院 2008
本文编号：3400374
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