鲍鱼裙边ACE抑制肽的分离纯化及作用机理的初步研究

发布时间：2025-05-04 18:15

　　高血压是一种常见的慢性病,现已成为全球主要的健康问题。血管紧张素转换酶（angiotensin I-converting enzyme,EC 3.4.15.1,ACE）在高血压调节系统中发挥重要作用,是高血压治疗药物筛选中的关键酶。本研究首先以猪肺为原料,制备ACE并对其进行性质分析。采用预处理、酸沉淀、硫酸铵盐析结合HiTrap Q HP强阴离子交换层析柱的方法对ACE进行分离纯化。SDS-PAGE结果显示,ACE分子量约为180 kDa,较市售ACE具有更高的纯度及比活力。PAS染色结果表明猪肺ACE是一种糖蛋白,其糖含量为34.37%。研究发现,Zn²⁺可强烈抑制ACE的酶活力,且对ACE的抑制作用呈现浓度依赖性。酶学性质表明,ACE在30-50℃,pH 6.0-10.0的范围内,维持较高的酶活力。圆二色谱结果显示猪肺ACE的热变性温度为（Tm）为58.5±0.4℃。酶动力学研究表明,ACE的K_m、K_cat和K_cat/K_m值分别为3.1×10^-4 mo...

【文章页数】：80 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1-1血管紧张素转化酶(ACE)对高血压的调节作用

继Skeggs等在1954年首次从马血浆中发现ACE能将血管紧张素I转化为血管紧张素II后,Ryan等[26]研究也发现血管紧张素I和缓激肽被肺内皮细胞腔表面的酶代谢,证实血管紧张素转换酶(ACE)参与体内血压的调节。进一步研究发现,ACE在高血压调节系统中均发挥调控作用。在AC....

图1-2技术路线图

本研究首先利用生化分离技术从猪肺中制备ACE,并对其基本性质、二级结构及疏水特性进行表征。在此基础上,以鲍鱼加工副产物裙边为原料制备胶原蛋白,利用酶解技术分解胶原蛋白制备ACE抑制肽,并对该ACE抑制肽进行分离纯化及结构鉴定。根据ACE抑制肽的氨基酸序列,利用固相合成技术对小肽进....

图3-1纯化ACE的SDS-PAGE分析

ACE是一种细胞膜蛋白,为了增加ACE的溶出率,本研究在对猪肺进行预处理时选用聚乙二醇辛基苯基醚(TritonX-100)作为促渗剂。TritonX-100是一种非离子型表面活性剂(或称去污剂),它能溶解脂质,增加细胞膜的通透性。对预处理产物进行SDS-PAGE分析(图3-1....

图3-2猪肺ACE纯化的SDS-PAGE分析

将透析完全后的粗蛋白(图3-2,泳道3)经0.22μm孔径的水系滤膜过滤除菌后上样于预先用缓冲液A平衡的HiTrapQHP强阴离子交换层析柱(5mL)。流洗结束后将缓冲液A更换为洗脱缓冲液(由缓冲液A和缓冲液B组成)进行线性梯度洗。结合酶活力、蛋白浓度和电泳结果,选择收集7....

本文编号：4042701