嗜热真菌F1208木聚糖酶互作蛋白的筛选与验证

发布时间：2025-06-10 05:06

　　苜蓿是多年生牧草,因其草质质量好,产量和营养价值高,鸡羊等各类畜禽均喜食,因此可作为重要的饲料作物。GH11家族木聚糖酶是一类能够水解木聚糖主链β-1,4-D-木糖苷键的糖苷水解酶类,其温度适应范围较广,耐热性较好,在苜蓿饲料工业生产中具有重要的研究价值。目前,国内外对木聚糖酶的研究主要在产木聚糖酶菌种的筛选和驯化、木聚糖酶的分子结构和功能改造、木聚糖酶的理化性质等方面,而利用酵母双杂交技术进行木聚糖酶相互作用蛋白的筛选方面的研究几乎没有报道。本研究旨在通过酵母双杂交技术筛选出与木聚糖酶的互作蛋白,从而为研究木聚糖酶对木聚糖的降解机制,木聚糖酶合成机制以及耐热木聚糖酶的生产奠定了理论基础。研究结果如下:1.嗜热真菌F1208酵母双杂交cDNA文库的构建利用SMART方法构建酵母双杂交cDNA文库,并检测cDNA文库的容量为1.50×10～6,滴定度是4.20×10～7 cfu/ml,且片段大小在200-2000 bp之间,说明该cDNA文库合格,可用于后续实验。2.酵母双杂交筛选木聚糖酶互作蛋白根据目的基因序列设计克隆引物扩增T-Xyn基因,并构建重组载体pGBKT7-T-Xyn,并检测...

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第1章 绪论
    1.1 木聚糖
    1.2 木聚糖酶
        1.2.1 木聚糖酶定义
        1.2.2 木聚糖酶分类
        1.2.3 木聚糖酶的应用
    1.3 耐热木聚糖酶的研究
    1.4 耐热木聚糖酶在饲料中的研究
    1.5 蛋白互作的研究方法
        1.5.1 酵母双杂交技术
        1.5.2 Pull-down技术
        1.5.3 其他验证蛋白互作的技术
    1.6 本研究的目的和意义
    1.7 技术路线
第2章 嗜热真菌F1208酵母双杂交cDNA文库的构建
    2.1 引言
    2.2 实验材料和方法
        2.2.1 实验材料
        2.2.2 实验方法
    2.3 实验结果与分析
        2.3.1 嗜热真菌F1208总RNA的提取与检测
        2.3.2 dscDNA的合成与纯化
        2.3.3 嗜热真菌F1208cDNA文库的检测
    2.4 本章小结
第3章 酵母双杂交筛选木聚糖酶互作蛋白
    3.1 引言
    3.2 实验材料
        3.2.1 实验材料
        3.2.2 实验仪器与药品
    3.3 实验方法
        3.3.1 木聚糖酶T-Xyn基因的克隆
        3.3.2 pGBKT7-T-Xyn诱饵载体的构建
        3.3.3 诱饵载体p GBKT7-T-Xyn的自激活及毒性检测
        3.3.4 酵母双杂交系统诱饵对cDNA文库的筛选
    3.4 实验结果与分析
        3.4.1 T-Xyn基因的克隆
        3.4.2 pGBKT7-T-Xyn诱饵载体的构建
        3.4.3 诱饵载体的自激活及毒性检测
        3.4.4 酵母双杂交系统诱饵对cDNA文库的筛选
    3.5 本章小结
第4章 木聚糖酶与候选蛋白的互作验证
    4.1 引言
    4.2 实验材料
        4.2.1 实验材料
        4.2.2 实验药品及仪器
    4.3 实验方法
        4.3.1 酵母双杂交验证互作蛋白
        4.3.2 Pull-down实验验证木聚糖酶与候选蛋白的互作
    4.4 实验结果
        4.4.1 酵母双杂交验证互作蛋白
        4.4.2 Pull-down实验验证木聚糖酶与候选蛋白的互作
    4.5 本章小结
第5章 讨论
    5.1 cDNA文库的构建
    5.2 酵母双杂交系统
    5.3 酵母双杂交筛选结果的分析
结论
参考文献
攻读硕士学位期间所发表的学位论文
致谢



本文编号：4050351