微滴式数字PCR评价保存时间和冻融对细菌基因组DNA稳定性的影响

发布时间：2025-08-12 21:39

　　 目的:定量分析5个常用的保存温度下,保存时间和反复冻融对沙门菌和志贺菌基因组DNA的影响。方法:将沙门菌和志贺菌基因组DNA分别于室温(20～25℃)、4℃、-20℃、-40℃和-80℃保存10 d,其中3个冻存温度的核酸每天冻融1次;以微滴式数字PCR检测靶标基因拷贝数的变化,以指数回归模型进行曲线拟合,分析靶标拷贝数随冻融次数(或天数)的变化趋势。结果:菌株核酸在4℃存放时,10 d以内靶标拷贝数保持稳定。冻存时,10次冻融后靶标拷贝数仅剩余25.3%～31.7%(沙门菌)和8.6%～18.4%(志贺菌);即使仅1次冻融,靶标拷贝数也会下降到初始值的71.5%～75.4%(沙门菌)和67.5%～76.1%(志贺菌)。室温(20～25℃)存放的核酸拷贝数变化趋势与-80℃保存冻融时类似。结论:本研究测定细菌靶标DNA拷贝数随冻融次数的变化趋势,可为研究者选择合适的细菌DNA保存方式和评估冻融对试验结果的影响提供数据依据。

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【部分图文】：

图1 同一温度下反复冻融和保存时间对沙门菌（左）和志贺菌（右）靶标拷贝数的影响纵坐标：以第0 d时的dd PCR测量值为100%，计算拷贝数测量值的百分比

高质量的核酸是保证检测结果准确的重要前提。低温冷冻保存是标本和核酸长期保存的重要手段，但不同的保存温度、保存时间和冻融次数都会影响核酸的完整性，进而影响核酸检测的准确性[9-11]。本研究以ddPCR方法分析了5个常用的保存温度下，反复冻融和保存天数对2种细菌的靶标基因拷贝数的....

图2 不同温度保存的沙门菌（左）和志贺菌（右）核酸，靶标基因拷贝数随冻融次数（或天数）变化的拟合曲线

图1同一温度下反复冻融和保存时间对沙门菌（左）和志贺菌（右）靶标拷贝数的影响纵坐标：以第0d时的ddPCR测量值为100%，计算拷贝数测量值的百分比本研究中，核酸只冻融1次时，在冻存温度（-20℃、-40℃和-80℃）保存10d（即对照组）与保存1d的靶标拷贝数相比，数....

本文编号：4059174