基于电化学免疫技术的丝绸文物分析鉴定研究

发布时间：2021-11-02 01:22

　　中华民族拥有悠久的文明史,而丝绸是中国源远流长文化的象征之一,我国先民早在数千年前,就开始收集蚕茧用于缫丝织绸。丝绸的起源与传播一直是研究热点,但众说纷纭下很难有准确结论。丝绸拥有优异的性能与华丽的外观,是财富的象征,在古代常被用于陪葬。近年来,越来越多的丝织品被发掘出土,对这些丝织品文物进行分析鉴定,可为追溯丝绸的起源和传播提供重要信息。丝绸文物的主要成分是丝素蛋白,多种外界因素都能使其发生老化降解,导致出土样品中往往丝素蛋白含量极低。因此,需要开发一种灵敏度高,特异性强的检测手段来分析鉴定丝织品文物。本论文采用电化学免疫技术,以丝素蛋白为完全抗原,制备特异性强的单克隆抗体,构建免标记型电化学免疫传感器,用于鉴定现代蚕丝和丝绸文物样,并与间接酶联免疫（ELISA）法横向比较,实现丝素蛋白的超灵敏检测;同时制备尺寸粒度较均一的金纳米颗粒（AuNPs）,基于AuNPs构建了另一种电化学免疫传感器,并与间接ELISA结合,用于分析多种蚕丝文物,进一步提高了检测灵敏度。首先,以桑蚕丝素蛋白为完全抗原,制备特异性鼠抗丝素蛋白单克隆抗体,基于单抗构建了间接ELISA和免标记型电化学免疫传感器。采... 

【文章来源】：浙江理工大学浙江省

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１．１?（Ａ）河南荥阳青台遗址出土的罗织物残片；（Ｂ）浙江钱山漾遗址出土的丝帛残片??

浙江理工大学硕士学位论文?基于电化学免疫技术的丝绸文物分析鉴定研宄??－＜〇－＜〇〇?ｏ??■■?－〇－＜〇?ｖ??Ｉ?？?４?＊??ｗＢｍ?４?＾?＾?ｍ?＾?＾８＊０＾??ｍ????Ｅ３?一??Ｉ?？ｔＸ＞ｉ５ＳＥ￥Ｓ－?ＷＷＷＷ??ＴＴｊＩＫ?ｗＯＯＯ?ｗｗｖｗ??Ｉ?Ｖ＾ＯＯＷｔＫｌＦ?〇ｒ．？〇．．＾??ｍｍｌｉｒａＭＴ??图１．２电化学免疫传感器示意图??１．５金纳米颗粒??金纳米颗粒是直径在１－ｌＯＯｎｍ的纳米粒子，具有高电子密度、介电特性和催化作用，??生物相容性好［１Ｑ１－１Ｇ３］。由氯金酸还原法可制备不同粒径的金纳米颗粒，溶液颜色根据纳米??颗粒的粒径大小由红色逐渐加深至紫色。金纳米颗粒具有比表面积大、表面反应活性高、??吸附能力强等优点，可用于固载和标记生物蛋白质同时，金纳米颗粒还具有良好的??氧化还原性能、光学性质和生物催化特性。此外，金纳米颗粒本身是一种纳米活性材料，??同时金与巯基间能形成较强的金硫共价键，使金纳米颗粒能与疏基丙酸一类的物质高效结??合，再通过对端羧基的活化，达到固定蛋白质的目的［｜＜）７，｜（）８１蛋白质分子在不失活的前提??下，也可以通过静电作用和疏水作用结合到金纳米颗粒的表面。诸多的优越性能使金纳米??颗粒被应用到各个领域［｜（）９＾。??１．６课题的提出和意义??中国拥有五千年的文明史，而丝绸是中国源远流长文化的象征之一。我国Ａ代先民早??在数千年前，就开始收集蚕茧用于缫丝织绸，中国也因此被认为是丝绸的起源地。纤维类??织物的出现时间可以追溯到约三万年前，丝织品的使用历史则相对较短，目前出土年代最??早的丝麻织物，距今约５６００年。这些发掘丁？河南青

浙江理工大学硕士学位论文?基于电化学免疫技术的丝绸文物分析鉴定研宄??电化学工作站?ＣＨＩ?６６０Ｅ?上海辰华仪器有限公司??金电极?３ｍｍ?上海越磁电子科技有限公司??销片电极?１＊１?ｃｍ２?上海越磁电子科技有限公司??万能显微镜?ＶＡＮＯＸＡＨＢ－１?日本Ｏｌｙｍｐｕｓ公司??参比电极?１?上海辰华仪器有限公司??２．３实验材料??２．３．１样品介绍??本实验分析鉴定的文物样由中国丝绸博物馆友情提供，其原貌如图２．１所示。Ａ为从??广东省南海一号考古遗址获取的疑似含有丝绸微痕迹的土壤样，Ｂ为浙江省安吉县五福遗??址出土的丝织品残片，Ｃ为新疆维吾尔自治区营盘遗址墓葬群出土的丝织品残片。??同时，实验用到的桑蚕茧样品也由中国丝绸博物馆提供，通过提取蚕茧中的桑蚕丝素??蛋白，以制备特异性高的单克隆抗体。??ＡＢＣ??ｌｃｍ?ｌｃｍ?ｌｃｍ??图２？丨文物样的原貌。（Ａ）南海一号土样；（Ｂ＞安吉楚墓丝织品残片；（Ｃ）营盘墓葬丝织品残片??２．３．２溶液的配制??脱胶液：称取５?ｇ碳酸钠加入到１０００?ｍＬ去离子水中均匀搅拌，待其完全溶解后备用。??磷酸盐缓冲液（ｐＨ?７．４）：称取０．２?ｇ氯化钾，０．２７?ｇ磷酸二氢钾，８?ｇ氯化钠和１．４２?ｇ??磷酸氢二钠加入到８００ｍＬ去离子水中均匀搅拌直至完全溶解后用容量瓶定容至１０００?ｍＬ，??调节溶液的ｐＨ至７．４，作为酶联免疫法步骤中的洗涤液备用。??碳酸盐缓冲液（ｐＨ９．６）：称取１．５ｇ碳酸钠和２．９ｇ碳酸氢钠于８０（）ｍＬ去离子水中均??匀搅拌，直至完全溶解后用容量瓶定容至ｌ〇〇〇ｍＬ，调节溶液的ｐＨ至９．６，作为抗原包被??１

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本文编号：3471064