人Ino80染色质重塑酶对细胞周期和p21 Waf1/Cip1 的调控作用研究以及hMOF蛋白在直肠癌中的表达研究
发布时间：2021-07-03 13:55
表观遗传学是近三十年兴起、而且发展迅速的一个遗传学分支学科。随着对表观遗传学研究的不断深入，越来越多的数据显示，几乎所有人类疾病，尤其是肿瘤中都存在表观遗传调控异常。研究和弄清表观遗传调控酶对基因转录调控以及其在肿瘤等疾病发生中的作用机制具有重要意义。我的研究课题主要围绕人Ino80染色质重塑酶和人MOF乙酰基转移酶而展开，本论文的主要研究内容概括如下：人Ino80（hIno80）染色体重塑酶复合物是SWI/SNF染色体重塑酶的家族成员之一，从酵母到人类具有高度保守性。虽然已有研究发现hIno80复合物能够参与DNA损伤修复并且导致细胞周期阻滞，但hIno80复合物在这个过程中所发挥的具体机制尚不清楚。本文中，首先，在敲低hIno80的细胞内，通过基因芯片检测技术得到基因表达谱。通过对基因表达谱内数据分析后发现，hIno80能够调控多个细胞周期相关基因的转录，尤其是p21基因。接下来，利用qRT-PCR、免疫印迹以及免疫荧光染色技术验证了这一结果，并首次证实hIno80复合物可以负调控p21的表达。鉴于p21在细胞周期进程中起着关键作用，我们推测，hIno80对p21的调控作用可能直接...
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：112 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略词表
第一章 绪论
第一节 研究背景
1.1 表观遗传学概述
1.2 hIno80 染色质重塑酶
1.2.1 hIno80 复合物的结构
1.2.2 hIno80 复合物的生物学功能
1.3 细胞周期
1.3.1 细胞周期简介
1.3.2 p21 蛋白在细胞周期中的作用机制
1.4 hMOF 乙酰基转移酶
1.4.1 hMOF 的结构与功能
1.4.2 hMOF 在肿瘤发生中的作用研究
第二节 研究目的、意义和内容
2.1 研究目的和立题依据
2.2 研究内容
第二章 hIno80 复合物调控细胞周期相关基因转录并参与维持正常细胞周期进程
第一节 引言
第二节 实验材料
2.1 实验仪器
2.2 实验试剂、抗体及其他材料
2.3 细胞株
第三节 实验方法
3.1 细胞培养
3.2 基因敲低实验（siRNA Knockdown）
3.3 RNA 提取
3.4 逆转录
3.5 实时定量 PCR（Quantitative Real-time PCR）
3.6 Western blot
3.7 DNA 芯片数据分析
3.8 细胞周期同步化
3.9 流式细胞分析
第四节 实验结果和分析
4.1 siRNA 敲低效果的验证
4.2 敲低 hIno80 复合物的基因表达谱分析
4.3 细胞周期相关基因的转录调控
4.4 敲低 hIno80 延迟 G2/M 至 G1 期的进程
第五节 本章小结
第三章 hIno80 复合物负调控 p21 基因的机制研究
第一节 引言
第二节 实验材料
2.1 实验仪器
2.2 实验试剂、抗体及其他材料
2.3 细胞株
第三节 实验方法
3.1 细胞培养
3.2 免疫荧光染色实验（Immunoflourescence，IF）
3.3 染色质免疫沉淀(Chromatin immunoprecipitation，ChIP)
3.4 CPT 和 Doxo 处理细胞
3.5 p53 缺失变体质粒构建
3.6 细胞内转染重组质粒
第四节 实验结果和分析
4.1 敲低 hIno80 上调 p21 的表达
4.2 hIno80 复合物富集于 p21 启动子上游的 p53 结合区
4.3 hIno80 复合物对 p21 基因的调控方式是 p53 蛋白依赖型的
4.4 hIno80 复合物富集于 p21 启动子上游需要 p53 的参与
第五节 本章小结
第四章 hIno80 复合物对染色体稳定性的影响
第一节 引言
第二节 实验材料
2.1 实验仪器
2.2 实验试剂、抗体及其他材料
2.3 细胞株
第三节 实验方法
3.1 细胞培养
3.2 基因敲低实验（Knockdown assay）
3.3 免疫荧光染色实验（Immunoflourescence，IF）
3.4 染色结果的分析统计
第四节 实验结果和分析
4.1 hIno80 对细胞核形态的影响
4.2 hIno80 对细胞质分裂、纺锤体形成的影响
4.3 hIno80 对中心粒形成的影响
第五节 本章小结
第五章 hMOF 乙酰基转移酶可成为潜在的癌症诊断标志物
第一节 引言
第二节 实验材料与方法
2.1 实验所用试剂和抗体
2.2 肿瘤样本的收集
2.3 提取组织细胞全部 RNA 及逆转录
2.4 Real-Time PCR 法检测组织内 mRNA 表达水平
2.5 组织全细胞抽出物的制备及 western blot 实验
第三节 实验结果和分析
3.1 hMOF 基因在大肠癌组织中的表达
3.2 hMOF 蛋白在大肠癌组织中的表达
3.3 hMOF 的低表达与临床病理特征的相关性
第四节 本章小结
参考文献
作者简历
致谢
本文编号：3262712
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：112 页
【学位级别】：博士
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摘要
Abstract
英文缩略词表
第一章 绪论
第一节 研究背景
1.1 表观遗传学概述
1.2 hIno80 染色质重塑酶
1.2.1 hIno80 复合物的结构
1.2.2 hIno80 复合物的生物学功能
1.3 细胞周期
1.3.1 细胞周期简介
1.3.2 p21 蛋白在细胞周期中的作用机制
1.4 hMOF 乙酰基转移酶
1.4.1 hMOF 的结构与功能
1.4.2 hMOF 在肿瘤发生中的作用研究
第二节 研究目的、意义和内容
2.1 研究目的和立题依据
2.2 研究内容
第二章 hIno80 复合物调控细胞周期相关基因转录并参与维持正常细胞周期进程
第一节 引言
第二节 实验材料
2.1 实验仪器
2.2 实验试剂、抗体及其他材料
2.3 细胞株
第三节 实验方法
3.1 细胞培养
3.2 基因敲低实验（siRNA Knockdown）
3.3 RNA 提取
3.4 逆转录
3.5 实时定量 PCR（Quantitative Real-time PCR）
3.6 Western blot
3.7 DNA 芯片数据分析
3.8 细胞周期同步化
3.9 流式细胞分析
第四节 实验结果和分析
4.1 siRNA 敲低效果的验证
4.2 敲低 hIno80 复合物的基因表达谱分析
4.3 细胞周期相关基因的转录调控
4.4 敲低 hIno80 延迟 G2/M 至 G1 期的进程
第五节 本章小结
第三章 hIno80 复合物负调控 p21 基因的机制研究
第一节 引言
第二节 实验材料
2.1 实验仪器
2.2 实验试剂、抗体及其他材料
2.3 细胞株
第三节 实验方法
3.1 细胞培养
3.2 免疫荧光染色实验（Immunoflourescence，IF）
3.3 染色质免疫沉淀(Chromatin immunoprecipitation，ChIP)
3.4 CPT 和 Doxo 处理细胞
3.5 p53 缺失变体质粒构建
3.6 细胞内转染重组质粒
第四节 实验结果和分析
4.1 敲低 hIno80 上调 p21 的表达
4.2 hIno80 复合物富集于 p21 启动子上游的 p53 结合区
4.3 hIno80 复合物对 p21 基因的调控方式是 p53 蛋白依赖型的
4.4 hIno80 复合物富集于 p21 启动子上游需要 p53 的参与
第五节 本章小结
第四章 hIno80 复合物对染色体稳定性的影响
第一节 引言
第二节 实验材料
2.1 实验仪器
2.2 实验试剂、抗体及其他材料
2.3 细胞株
第三节 实验方法
3.1 细胞培养
3.2 基因敲低实验（Knockdown assay）
3.3 免疫荧光染色实验（Immunoflourescence，IF）
3.4 染色结果的分析统计
第四节 实验结果和分析
4.1 hIno80 对细胞核形态的影响
4.2 hIno80 对细胞质分裂、纺锤体形成的影响
4.3 hIno80 对中心粒形成的影响
第五节 本章小结
第五章 hMOF 乙酰基转移酶可成为潜在的癌症诊断标志物
第一节 引言
第二节 实验材料与方法
2.1 实验所用试剂和抗体
2.2 肿瘤样本的收集
2.3 提取组织细胞全部 RNA 及逆转录
2.4 Real-Time PCR 法检测组织内 mRNA 表达水平
2.5 组织全细胞抽出物的制备及 western blot 实验
第三节 实验结果和分析
3.1 hMOF 基因在大肠癌组织中的表达
3.2 hMOF 蛋白在大肠癌组织中的表达
3.3 hMOF 的低表达与临床病理特征的相关性
第四节 本章小结
参考文献
作者简历
致谢
本文编号：3262712
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